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原文传递一种基于固体核磁共振技术检测RNA结构的方法

专利名称：	一种基于固体核磁共振技术检测RNA结构的方法
摘要：	本发明公开了一种基于固体核磁共振技术检测RNA结构的方法。通过设定一种新型二维固体核磁脉冲序列hCHNH，记录核糖核苷酸碱基中13C原子核与氨基和亚氨基上1H原子核的化学位移相关，获取长程相关信息。与常用的hCNH序列不同，hCHNH利用两个高效率的包含氢原子核的CP传递方法代替效率较低的13C‑15N CP传递，实现了在高转速固体核磁的条件下，灵敏度提高60％以上。基于hCHNH脉冲序列的RNA结构固体核磁共振技术检测，还可以实现RNA中碱基配对类型的区分，拓展了固体核磁共振技术在解析RNA结构方面的应用。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	北京大学
发明人：	王申林;赵莎
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-25T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-12T00:00:00+0800
申请号：	CN201910554062.X
公开号：	CN110441344A
代理机构：	北京君尚知识产权代理有限公司
代理人：	孙博宁
分类号：	G01N24/08(2006.01);G;G01;G01N;G01N24
申请人地址：	100871北京市海淀区颐和园路5号北京大学
主权项：	1.一种基于固体核磁共振技术检测RNA结构的方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)制备待测RNA样品，所述RNA样品中至少一种碱基由15N和13C标记； (2)使用固体核磁共振波谱仪对RNA样品进行检测； (3)收集与分析检测图谱；其中，步骤(2)中在使用固体核磁共振波谱仪对RNA样品进行检测之前，进行脉冲序列hCHNH的设定：首先将1H信号全部激发，信号传递到13C上，记录13C的化学位移；在13C演化过程中，对1H去耦；之后13C将信号传给1H，接收到信号的1H再将信号传给直接相连的15N核；压制掉溶剂信号；最后将15N信号传回直接相连的1H，记录1H化学位移。 2.如权利要求1所述的一种基于固体核磁共振技术检测RNA结构的方法，其特征在于，1H-13C CP传递设定的接触时间为1ms-10ms。 3.如权利要求1所述的一种基于固体核磁共振技术检测RNA结构的方法，其特征在于，采用TPPM脉冲对1H去耦。 4.如权利要求1所述的一种基于固体核磁共振技术检测RNA结构的方法，其特征在于，1H-15N CP传递设定的接触时间为100μs-1000μs。 5.如权利要求1所述的一种基于固体核磁共振技术检测RNA结构的方法，其特征在于，利用MISSISIPPI脉冲序列压制掉溶剂信号。 6.如权利要求1所述的一种基于固体核磁共振技术检测RNA结构的方法，其特征在于，步骤(1)中所述待测RNA样品的制备方法包括体外转录法、固相合成方法或生物提取法。 7.如权利要求1或6所述的一种基于固体核磁共振技术检测RNA结构的方法，其特征在于，步骤(1)中所述待测RNA样品纯度在90％以上。 8.如权利要求1或6所述的一种基于固体核磁共振技术检测RNA结构的方法，其特征在于，待测RNA固体样品中RNA质量大于1mg。 9.如权利要求1所述的一种基于固体核磁共振技术检测RNA结构的方法，其特征在于，步骤(3)中所述检测图谱包括一维1H-15N CP谱图，一维1H-13C CP谱图，一维1H-31P CP谱图，二维1H-15N hNH谱图，二维1H-13C hCH谱图，二维13C-15N hNC谱图，二维1H-15N hCNH谱图，二维1H-15N hCN(PAR)NH谱图，二维15N-13C TEDOR谱图，二维13C-13C DARR谱图。 10.如权利要求1所述的一种基于固体核磁共振技术检测RNA结构的方法，其特征在于，魔角旋转速率为40kHz。所述脉冲序列hCHNH的设定条件为：1H的π/2脉冲为2.5μs，13C的π/2脉冲为3.5μs，15N的π/2脉冲为4.5μs；循环等待时间为2s；在1H-13C CP传递和13C-1H CP传递过程中，13C的连续锁场功率均为60kHz，1H的锁场功率为100kHz，接触时间为2ms；在13C化学位移演化期，采用TPPM脉冲对1H去耦，去耦功率10kHz；利用MISSISIPPI脉冲序列对溶剂的信号进行压制；1H-15N CP传递和15N-1H CP传递中，接触时间设为300μs；1H-15N和15N-1H传递时，15N的连续锁场功率设为50kHz，1H的锁场功率为90kHz。
所属类别：	发明专利