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原文传递一种犬C反应蛋白快速定量分析检测卡及其制备方法

专利名称：	一种犬C反应蛋白快速定量分析检测卡及其制备方法
摘要：	本发明公开了一种犬C反应蛋白快速定量分析检测卡及其制备方法，所述犬C反应蛋白快速定量分析检测卡包括PVC底板、样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水滤纸，所述结合垫上预包被荧光微球标记的抗‑CRP单克隆抗体Ab1，所述硝酸纤维膜上设有一条包被羊抗‑鼠IgG单克隆抗体的质控C线和一条包被抗‑CRP单克隆抗体Ab2的检测T线。当进行检测时，样本中的CRP将被荧光标记抗体Ab1捕获形成复合物，由于层析作用复合物沿膜向前移动，被检测线处的抗体Ab2截留，形成“荧光标记Ab1‑CRP‑Ab2”复合物，该复合物在紫外光激发下能激发产生615nm的红光，激发光饱和时，激发产生的荧光强度与试纸条上富集的反应复合物数量成正比，即可计算出检样中抗原的含量。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	山东畜牧兽医职业学院
发明人：	曹雷;温华梅
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-12T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-12T00:00:00+0800
申请号：	CN201910739778.7
公开号：	CN110441530A
代理机构：	北京中济纬天专利代理有限公司
代理人：	赵园园
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	261000山东省潍坊市胜利东街88号
主权项：	1.一种犬C反应蛋白快速定量分析检测卡及其制备方法，其特征在于：所述犬C反应蛋白快速定量分析检测卡包括PVC底板(1)、样品垫(2)、结合垫(3)、硝酸纤维素膜(4)和吸水滤纸(5)，所述样品垫(2)、结合垫(3)、硝酸纤维素膜(4)和吸水滤纸(5)设置在PVC底板(1)上并依次衔接，所述结合垫(3)上预包被荧光微球标记的抗-CRP单克隆抗体Ab1，所述硝酸纤维膜(4)上设有一条包被羊抗-鼠IgG单克隆抗体的质控C线(6)和一条包被抗-CRP单克隆抗体Ab2的检测T线(7)。 2.根据权利要求1所述的一种犬C反应蛋白快速定量分析检测卡及其制备方法，其特征在于，所述样品垫(2)的制备方法包括如下步骤： (1)配置样品垫处理液：含1％牛血清蛋白、2％聚乙二醇4000和0.5％Triton X-100的甘氨酸缓冲液； (2)将样品垫处理液以0.5μl/cm2的量比喷涂在样品垫(2)上。 3.根据权利要求1所述的一种犬C反应蛋白快速定量分析检测卡及其制备方法，其特征在于，所述结合垫(3)的制备方法包括如下步骤：将用荧光微球标记的-CRP单克隆抗体Ab1按3.5μl/cm2的量比喷涂在结合垫(3)上。 4.根据权利要求1所述的一种犬C反应蛋白快速定量分析检测卡及其制备方法，其特征在于，所述硝酸纤维素膜(4)的制备方法包括如下步骤： (1)用含3％蔗糖的pH＝7.4的0.01M的磷酸盐缓冲液将羊抗-鼠IgG单克隆抗体稀释至1mg/mL，即为质控C线工作液； (2)用含3％蔗糖的pH＝7.4的0.01M的磷酸盐缓冲液将抗-CRP单克隆抗体Ab2稀释至1mg/mL，即为检测T线工作液； (3)取PVC底板(1)，粘贴硝酸纤维膜(4)； (4)在硝酸纤维膜上划质控C线(6)和检测T线(7)，划线浓度均为1μl/cm； (5)将完成划线的粘贴硝酸纤维膜(4)的PVC底板(1)置于干燥箱中35～40摄氏度干燥处理。 5.根据权利要求1所述的一种犬C反应蛋白快速定量分析检测卡及其制备方法，其特征在于，所述荧光微球标记的抗-CRP单克隆抗体Ab1的制备方法包括如下步骤： (1)将1mL标记缓冲液0.1M MES缓冲液和1mg荧光微球加入到离心管中，涡旋均匀； (2)在上述离心管中加入20～50μL标记活化剂A和20～50μL标记活化剂B，在旋转培养器上活化30min； (3)将活化后的荧光微球离心处理30min，保留沉淀，加入500μL淬灭剂，90W功率超声处理，每个超声周期中超声2s，间歇5s，完成1～3个超声周期； (4)在淬灭后的荧光微球中加入20～200μg抗-CRP单克隆抗体Ab1，涡旋均匀，在旋转培养器上活化30min； (5)加入2mL标记封闭液，超声2s，间歇5s，重复3次，在旋转培养器上活化30min； (6)离心处理30min，保留沉淀，加入2mL标记荧光球稀释液，90W功率超声处理，每个超声周期中超声2s，间歇5s，完成3～5个超声周期。 6.根据权利要求5所述的一种犬C反应蛋白快速定量分析检测卡及其制备方法，其特征在于，所述荧光微球为含有稀土铕元素的荧光错配物的聚苯乙烯微球，所述荧光微球的密度为1.05g/cm3，所述荧光微球的的直径为300nm，所述荧光微球的功能基团为羧基。 7.根据权利要求5所述的一种犬C反应蛋白快速定量分析检测卡及其制备方法，其特征在于，所述标记活化剂A为含50mg/mL NHS的MES缓冲液，所述标记活化剂B为含50mg/mL EDC的MES缓冲液。 8.根据权利要求5所述的一种犬C反应蛋白快速定量分析检测卡及其制备方法，其特征在于，所述标记封闭液为含3％牛血清蛋白的0.04M pH＝8.0的乙醇胺溶液，所述标记荧光微球稀释液为含1％牛血清蛋白、0.5％牛丙种球蛋白、3％蔗糖的甘氨酸缓冲液，所述淬灭剂为含0.25％甲醇的MES缓冲液。
所属类别：	发明专利