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原文传递一种检测血液中降钙素原的试剂盒及制备方法

专利名称：	一种检测血液中降钙素原的试剂盒及制备方法
摘要：	本发明公开了一种检测血液中降钙素原的试剂盒及制备方法，试剂盒包括包被捕获抗体的固相载体、生物素标记的检测抗体、荧光素标记链霉亲和素、洗涤缓冲液等；本发明石英针表面覆有具有生物相容性的多糖复合物，多糖复合物可有效增强特异性的免疫信号，检测信号的放大是通过在多糖复合物表面形成多层荧光素‑链霉亲和素分子层而实现的；本发明在洗涤缓冲液中添加洗涤能力较强的SDS和Triton‑X100，同时提高洗涤液的离子强度，有效控制了分子之间的非特异性相互作用，进而实现检测结果的低背景和高信噪比，提高检测的敏感性和准确性。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	浙江;33
申请人：	宁波奥丞生物科技有限公司
发明人：	周义正;唐静;陈星星;黄丹娣;余城滨
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-17T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-12T00:00:00+0800
申请号：	CN201910761050.4
公开号：	CN110441531A
代理机构：	北京盛凡智荣知识产权代理有限公司
代理人：	赵芳蕾
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	315000浙江省宁波市海曙区望春工业园区春华路885号
主权项：	1.一种检测血液中降钙素原的试剂盒及制备方法，其特征在于，包括包被捕获抗体的固相载体、生物素标记的检测抗体、荧光素标记链霉亲和素、洗涤缓冲液。 2.如权利要求1所述的一种检测血液中降钙素原的试剂盒，其特征在于，所述固相载体为石英针。 3.如权利要求1所述的一种检测血液中降钙素原的试剂盒，其特征在于，所述固相载体上涂覆有多糖复合物，多糖复合物为含质量分数0.5～2.5％壳聚糖、0.1～0.5％甘油，0.5～1.5％聚乙二醇1000的去离子水溶液。 4.如权利要求1所述的一种检测血液中降钙素原的试剂盒，其特征在于，所述洗涤缓冲液为含0.15～0.35M的NaCl、0.05～0.1％vol的曲拉通X-100、3～6g/L的十二烷基肌氨酸钠的PBS缓冲液(0.01M，pH7.4)。 5.一种检测血液中降钙素原的试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： (1)包被捕获抗体的固相载体：将石英针的下端在多糖复合物中浸泡1-3分钟，4℃冷冻干燥，将降钙素原捕获抗体用0.01M的PBS缓冲液稀释到1mg/mL，将干燥后的石英针下端部放置于降钙素原捕获抗体溶液中，24℃反应2小时进行标记，标记结束后用0.1M的PBS缓冲液洗涤3次，再置于封闭液中封闭8-12h，封闭液为含有1％BSA、0.1％酪蛋白、3％蔗糖的Tris-Hcl缓冲液，制得包被捕获抗体的固相载体； (2)生物素标记的检测抗体：将降钙素原检测抗体用0.01M的PBS缓冲液稀释到1mg/mL，按质量比抗体：生物素＝1:3-1:8的比例添加生物素，24℃反应8-12小时进行标记，标记结束后用0.1M的PBS缓冲液透析16-24小时，换液3次，制得生物素标记的检测抗体； (3)洗涤缓冲液：称量3.58g Na2HPO4·12H2O，0.4g KCl，0.54g KH2PO4，加800mL双蒸水溶解，调节pH值为7.4，定溶至1000mL，制得PBS缓冲液，根据下述浓度计算并称取配制1L洗涤缓冲液所需各原料的量：0.35M的NaCl、0.1％vol的曲拉通X-100、4g/L的十二烷基肌氨酸钠，称量完毕后置于上述制备的PBS缓冲液中溶解，并混合均匀，即得洗涤缓冲液。
所属类别：	发明专利