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原文传递一种测定25-羟基维生素D含量的方法

专利名称：	一种测定25-羟基维生素D含量的方法
摘要：	本发明涉及分析检测技术领域，尤其涉及一种测定25‑羟基维生素D含量的方法。本发明利用解离液使生物样本内25‑羟基维生素D从维生素D结合蛋白中解离出来，且所述解离液成分温和，不会对抗体造成破坏，因此可以将生物样本、解离液和荧光微球工作液三者共同孵育，使荧光微球工作液中的抗‑25‑羟基维生素D抗体与生物样本中解离出来的25‑羟基维生素D充分结合，能够有效提高灵敏度，线性范围为3～100ng/mL。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	北京丹大生物技术有限公司
发明人：	周建平;王艳敏
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-23T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-12T00:00:00+0800
申请号：	CN201910782803.X
公开号：	CN110441537A
代理机构：	北京高沃律师事务所
代理人：	马小星
分类号：	G01N33/82(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	100190北京市通州区中关村科技园区通州园光机电一体化产业基地嘉创路5号1号楼301-303室
主权项：	1.一种测定25-羟基维生素D含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：将生物样本、解离液和荧光微球工作液混合后进行孵育，得到孵育料液；将所述孵育料液加到检测卡的加样孔中，进行层析反应，得到反应检测卡；测定所述反应检测卡的荧光强度，根据校准曲线和反应检测卡的荧光强度，得到生物样本中25-羟基维生素D的含量；其中，所述解离液包括巴比妥钠缓冲液、皂素和吐温-20；所述荧光微球工作液中的荧光微球包括抗-25-羟基维生素D抗体标记的荧光微球和抗-鸡IgY标记的荧光微球。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述巴比妥钠缓冲液的pH值为7.4，浓度为20～200mmol/L；所述解离液中皂素的含量为1～5wt.％，吐温-20的含量为0.5～2wt.％。 3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述荧光微球工作液中的稀释液包括硼酸-硼砂缓冲液、牛血清白蛋白、海藻糖、聚乙烯吡咯烷酮和防腐剂。 4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述硼酸-硼砂缓冲液的pH值为8.0，浓度为50mmol/L；所述稀释液中牛血清白蛋白的含量为0.5～2wt.％，海藻糖的含量为0.5～2wt.％，聚乙烯吡咯烷酮的含量为0.5～2wt.％，防腐剂的含量为0.02～0.2wt.％。 5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗-25-羟基维生素D抗体标记的荧光微球中，抗-25-羟基维生素D抗体的标记量为50～200μg/mL；所述抗-鸡IgY标记的荧光微球中，抗-鸡IgY的标记量为100～300μg/mL。 6.根据权利要求1～5任一项所述的方法，其特征在于，所述生物样本、解离液和荧光微球工作液的体积比为2：(7.5～8.5)：(2.5～3.5)。 7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述孵育的温度为室温，时间为5～15min。 8.根据权利要求1或7所述的方法，其特征在于，所述层析反应的温度为室温，时间为8～12min。 9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物样本包括人的血清或血浆。 10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述25-羟基维生素D包括25-羟基维生素D2和25-羟基维生素D3。
所属类别：	发明专利