详情

原文传递一种脑卒中标志物免疫传感器的制备方法和检测方法

专利名称：	一种脑卒中标志物免疫传感器的制备方法和检测方法
摘要：	本发明属于免疫传感器技术领域，涉及一种脑卒中标志物免疫传感器的制备方法和检测方法。本发明SERS信号发生明显变化，实现SERS强度检测的方法来进行浓度的评价，从而提高检测的准确性。有效利用了纳米材料的特性，利用拉曼光谱仪进行检测，极大地降低了检测成本，本发明具有成本低、快速、简便、敏感且可重复性好等优点。基于表面修饰拉曼信号分子，产生SERS变化，可实现对不同抗原浓度的评价。纳米颗粒的比表面积大，进一步提高了检测的灵敏度和稳定性，该传感器制备方法简单、成本低、灵敏度高、稳定性好。检测只需要一步即可，检测步骤简单方便，不容易出错。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	山东第一医科大学(山东省医学科学院)
发明人：	孙保亮;王莹;杨明峰;袁慧;毛蕾蕾;董其威;曹荷清
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-30T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-19T00:00:00+0800
申请号：	CN201910694102.0
公开号：	CN110470828A
代理机构：	济南泉城专利商标事务所
代理人：	张贵宾
分类号：	G01N33/531(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	271099 山东省泰安市泰山区长城路中段619号
主权项：	1.一种脑卒中标志物的SERS免疫传感器的制备方法,其特征在于,包括如下步骤: 步骤1:将核壳结构金纳米颗粒超声分散至水中，得到核壳结构金纳米颗粒溶液备用，步骤2:将导电玻璃清洗并烘干后浸泡至无水乙醇和3-氨丙基三乙氧基硅烷的混合液中,密封反应后清洗,得到氨基化处理的导电玻璃片,然后将氨基化处理的导电玻璃片竖直插入核壳结构金纳米颗粒溶液中，磁力搅拌后用超纯水清洗，晾干后得到金纳米SERS基底；步骤3：将金纳米SERS基底浸入到脑卒中标志物抗体溶液中，得到脑卒中标志物抗体修饰的基底，BSA封闭后，用水冲洗干净，晾干；步骤4：核壳金纳米颗粒加入到拉曼信号分子标记的脑卒中标志物抗体混合溶液中得到核壳金纳米颗粒/信号分子标记的脑卒中标志物抗体修饰探针，BSA封闭后用清水离心洗净；步骤5：将步骤3中晾干后的基底浸泡PBS溶液中，添加不同浓度脑卒中标志物，得到脑卒中标志物的SERS免疫传感器。 2.根据权利要求1所述的脑卒中标志物的SERS免疫传感器的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)中核壳结构金纳米颗粒制备方法为：将1-2 g HAuCl4溶于100-150 mL纯水中配成HAuCl4溶液，4 -5℃避光保存；再将200 -220mL、 4-5 ℃预冷的纯水置于磁力搅拌器上，在搅拌状态下快速加入3 -4mL 上述配制的HAuCl4溶液，分散均匀后再加入1 mL 0.2 M的K2CO3溶液，搅拌3-10分钟后快速加入新鲜配制的0.5 mg/mL NaBH4溶液9-10 mL；反应溶液由浅黄色变为紫黑色再变为酒红色，说明有GNPs的生成；继续搅拌5 -10min后置于4-5 ℃冰箱保存备用；通过静电吸附作用，GNPs吸附到SiO2-APTES表面，形成SiO2/GNPs阵列；为了让GNPs更充分的吸附，此过程连续搅拌5-6 h；后用超纯水清洗3-4次，以去除未吸附在SiO2表面的GNPs；置于空气中自然干燥后备用。 3.根据权利要求1所述的脑卒中标志物的SERS免疫传感器的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)中核壳结构金纳米颗粒通过紫外-可见-分光光度计测得OD700nm=1.0-2.0。 4.根据权利要求1所述的脑卒中标志物的SERS免疫传感器的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)中导电玻璃规格为5 cm × 0.9 cm 大小的长方形，导电玻璃清洗过程为依次用洗洁精、自来水、超纯水、无水乙醇各自超声清洗1-4次，每次超声20分钟以上，烘干温度为80-90℃；无水乙醇和3-氨丙基三乙氧基硅烷的混合液中无水乙醇为10-20mL，3-氨丙基三乙氧基硅烷为100-200μL, 密封反应时间为12-15h；氨基化处理的导电玻璃片竖直插入核壳结构金纳米颗粒溶液中，室温下进行磁力搅拌12小时，后取出用超纯水淋洗5次。 5.一种脑卒中标志物的SERS免疫传感器的检测方法，其特征在于，具体检测方法如下： S1：标准脑卒中标志物样品配置成浓度为0.1 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL、40ng/mL、80 ng/mL的PBS溶液作为测试溶液，并在室温条件下孵育10-60 min； S2：测试溶液在PBS中进行SERS分析，选用785 nm激光； S3：启动SERS免疫传感反应，分别测量0.1 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL、40ng/mL、80 ng/mL的溶液对应的SERS强度，建立SERS光谱强度与溶液浓度之间的定量关系。 6.根据权利要求5所述脑卒中标志物的SERS免疫传感器的检测方法，其特征在于，所述测试溶液孵育时间为30 min。 7.根据权利要求5所述脑卒中标志物的SERS免疫传感器的检测方法，其特征在于，所述PBS溶液的pH=7.0。
所属类别：	发明专利