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原文传递幽门螺旋杆菌CagL蛋白检测试剂盒及其检测方法

专利名称：	幽门螺旋杆菌CagL蛋白检测试剂盒及其检测方法
摘要：	本发明提出了一种幽门螺旋杆菌CagL蛋白检测试剂盒及其检测方法，试剂盒在微孔板上包被鼠单克隆CagL抗体，配以家兔多克隆CagL抗体以及HRP标记的山羊抗家兔IgG抗体，采用双抗体夹心法原理检测待检样本中的CagL蛋白；本发明为幽门螺旋杆菌的快速诊断以及综合诊治提供了一种方便、有效的工具，有着较广的应用前景，值得临床进一步研究推广。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	镇江德威乐普能源环保科技有限公司
发明人：	李冠霖;邵世和;徐驰;王晔
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-18T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-19T00:00:00+0800
申请号：	CN201910648157.8
公开号：	CN110470845A
代理机构：	南京源古知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	马晓辉
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	212000 江苏省镇江市丹徒区智慧南大道162号
主权项：	1.幽门螺旋杆菌CagL蛋白检测试剂盒,其特征为，试剂盒在微孔板上包被鼠单克隆CagL抗体，配以家兔多克隆CagL抗体以及HRP标记的山羊抗家兔IgG抗体，采用双抗体夹心法原理检测待检样本中的CagL蛋白。 2.如权利要求1所述的幽门螺旋杆菌CagL蛋白检测试剂盒,其特征为，试剂盒的组成成份包括：已包被CagL蛋白单克隆抗体的96孔的微孔板、家兔多克隆CagL蛋白抗体、HRP标记的山羊抗家兔IgG抗体、阳性对照品、阴性对照品、包被缓冲液、浓缩洗涤液、底物A、底物B和终止液。 3.如权利要求2所述的幽门螺旋杆菌CagL蛋白检测试剂盒,其特征为，已包被CagL蛋白单克隆抗体的96孔的微孔板的制备方法为：用包被缓冲液将CagL单克隆抗体稀释至1:32000，加入96孔的微孔板，每孔100ul，4℃过夜，次日PBST洗板3次，每次5min，最后拍干。 4.如权利要求2或3所述的幽门螺旋杆菌CagL蛋白检测试剂盒,其特征为，阳性对照品为CagL蛋白。 5.如权利要求4所述的幽门螺旋杆菌CagL蛋白检测试剂盒,其特征为，阴性对照品为1％BSA。 6.如权利要求5所述的幽门螺旋杆菌CagL蛋白检测试剂盒,其特征为，包被缓冲液为PH9.6的CBS；缩洗涤液为PBST缓冲液。 7.如权利要求6所述的幽门螺旋杆菌CagL蛋白检测试剂盒,其特征为，底物A为过氧化氢；底物B为四甲基联苯胺；终止液为2M H2SO4。 8.使用上述任一权利要求所述的试剂盒的检测方法，包括以下步骤： 1)包被：用包被缓冲液将CagL单克隆抗体稀释至1:32000，加入96孔微孔板，每孔100ul，4℃过夜，次日PBST洗板3次，每次5min，最后拍干； 2)封闭：加入5％脱脂奶粉，每孔200μL，37℃温育2h； 3)洗涤：弃封闭液，用PBST缓冲液洗板3次，每次5min，最后拍干； 4)加待检样本：每孔加入100ul待检标本，同时加入阴性对照品和阳性对照品各100ul,37℃孵育1h； 5)洗涤：弃液体，用PBST缓冲液洗板3次，每次5min，最后拍干； 6)加多抗：用CBS将家兔多克隆CagL抗体稀释至1：32000，加入微孔板，每孔100ul，37℃温育1h； 7)洗涤：弃液体，用PBST缓冲液洗板3次，每次5min，最后拍干； 8)加酶标二抗：每孔加入1:4000倍稀释的HRP标记的山羊抗家兔IgG抗体100μL，37℃孵育1h； 9)洗涤：弃液体，用PBST缓冲液洗板3次，每次5min，最后拍干； 10)显色：每孔加入50μL底物A和底物B，37℃显色20min； 11)终止反应：每孔加入50μL2M H2SO4终止液； 12)测定OD450/620nm：酶标仪测定波长为450/620nm时的OD值。 9.如权利要求8所述的试剂盒的检测方法，其特征为，样本的判断方法为：样本检测到的OD450/620nm值〉阴性样本的OD450/620nm均值(X)+3SD时,则可以判定其为阳性。 10.如权利要求9所述的试剂盒的检测方法，其特征为，试剂盒应用与检测幽门螺旋杆菌。
所属类别：	发明专利