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原文传递检测血清中幽门螺旋杆菌抗体含量的试剂盒及其使用方法

专利名称：	检测血清中幽门螺旋杆菌抗体含量的试剂盒及其使用方法
摘要：	本发明公开了生物化学相关技术领域的检测血清中幽门螺旋杆菌抗体含量的试剂盒及其使用方法，检测血清中幽门螺旋杆菌抗体含量的试剂盒，包括相互独立包装的抗试剂A、抗试剂B、磁微粒试剂、校准品、质控品、清洗液和发光底物；本发明采用以磁微粒子作为免疫反应的固相，利用化学发光酶联免疫分析方法与化学发光类测定仪器配合，用于测定人体血清中的幽门螺旋杆菌抗体含量，并且可以在全自动化学发光仪上同时测定多个样本，实现幽门螺旋杆菌抗体的高通量快速化测定，准确度高，特异性强，精确度和检测效率有了较大的提高。
专利类型：	发明专利
申请人：	江苏泽成生物技术有限公司
发明人：	丁建华;刘振世;顾丽;薛婷;王琳;庞吉丰
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
申请号：	CN202010124942.6
公开号：	CN111208291A
代理机构：	上海联科律师事务所
代理人：	赵旭
分类号：	G01N33/543;G01N33/533;G01N33/535;G01N33/569;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/543;G01N33/533;G01N33/535;G01N33/569
申请人地址：	214400 江苏省无锡市江阴市东盛西路6号(扬子江生物医药加速器A4-1)
主权项：	1.检测血清中幽门螺旋杆菌抗体含量的试剂盒，其特征在于：包括相互独立包装的抗试剂A、抗试剂B、磁微粒试剂、校准品、质控品、清洗液和发光底物；所述抗试剂A为包括异硫氰酸荧光素标记的幽门螺旋杆菌抗体连接物的BSA缓冲溶液；所述抗试剂A通过包括以下步骤的操作制备而成： Sa1：用抗试剂缓冲液将异硫氰酸荧光素配制成浓度为1.0～5.0mg/mL的异硫氰酸荧光素溶液； Sa2：向幽门螺旋杆菌抗体中加入所述幽门螺旋杆菌抗体质量1.1～1.5倍的所述异硫氰酸荧光素溶液并充分混合； Sa3：用pH为8～9的碳酸盐缓冲液调节pH平衡，再用凝胶层析分离纯化制得异硫氰酸荧光素标记的幽门螺旋杆菌抗体包被抗体；所述抗试剂B为包括碱性磷酸酶标记的幽门螺旋杆菌抗原连接物的BSA的缓冲溶液；所述抗试剂B通过包括以下步骤的操作制备而成： Sb1：用抗试剂缓冲液将碱性磷酸酶配制成浓度为1.0～5.0mg/mL的碱性磷酸酶溶液； Sb2：用幽门螺旋杆菌抗原和碱性磷酸酶分别将反应基团分别活化，然后按照摩尔比为碱性磷酸酶：幽门螺旋杆菌抗原为1:1～1:3的比例，在催化剂的催化下充分混匀进行偶联反应； Sb3：使用pH为8～9的Tris缓冲液调节pH平衡，再用凝胶柱分离纯化制得碱性磷酸酶标记的幽门螺旋杆菌抗原连接物；所述磁微粒试剂通过包括抗异硫氰酸荧光素羊抗FITC与羧基磁珠偶联物的BSA缓冲溶液；所述校准品和所述质控品均通过包括以下步骤的操作制备而成：在1L的含BSA缓冲液中加入0.01～0.05g的四环素和0.1～0.5g的硫酸新霉素，然后加入幽门螺旋杆菌抗体并充分溶解；所述清洗液通过将150～170gNaCl、3～5gKCl、24～24.4g三羟甲基氨基甲烷、0.8～1.2mL吐温20溶于900ml双蒸水中，再用HCl调整至pH7.2～7.6，最后用双蒸水定容至1000ml制备而成；所述发光底物通过将ALPS溶解于缓冲液中制备而成。 2.根据权利要求1所述的检测血清中幽门螺旋杆菌抗体含量的试剂盒，其特征在于：所述抗试剂缓冲液通过包括以下步骤的操作制备而成：准确称取如下组分：10～20gNa2PO3H·12H2O、1～2gNaPO3H2·12H2O、3～10g新生牛血清；将称得的各组分加入1L的纯化水中，充分搅拌至完全溶解；调节pH值为5～6即得。 3.根据权利要求2所述的检测血清中幽门螺旋杆菌抗体含量的试剂盒，其特征在于：调节pH值的试剂为4M的HCl。 4.根据权利要求1所述的检测血清中幽门螺旋杆菌抗体含量的试剂盒，其特征在于：Sa2在避光条件下操作。 5.根据权利要求1所述的检测血清中幽门螺旋杆菌抗体含量的试剂盒，其特征在于：所述校准品和所述质控品均经过0.22μm滤膜处理。 6.根据权利要求1所述的检测血清中幽门螺旋杆菌抗体含量的试剂盒，其特征在于：所述磁微粒试剂通过包括以下步骤的操作制备而成： Sc1：将充分混匀后的羧基磁珠浓缩液在磁场内放置15～20min，待羧基磁珠全部沉降后吸去上清，向所述羧基磁珠中加入所述羧基磁珠体积2～5倍的磁微粒缓冲液，震荡清洗20～30min后在磁场内放置15～20min再吸去上清；重复清洗羧基磁珠1～3遍；最后将羧基磁珠混合液定容到10～50mg/mL，制得羧基磁珠溶液； Sc2：向所述羧基磁珠溶液中加入所述羧基磁珠溶液质量0.8～1.2％的抗异硫氰酸荧光素羊抗FITC，在2～8℃内保持混匀状态反应16～20h； Sc3：将Sc2制得的溶液在磁场中放置12～18min，待所述羧基磁珠沉降后用磁微粒缓冲液洗1～3遍，随后定容至8～12mg/mL，2～8℃保存。 7.根据权利要求6所述的检测血清中幽门螺旋杆菌抗体含量的试剂盒，其特征在于：所述磁微粒缓冲液通过将12.12～15.26mg的Tris、5.82～8.58mg的NaCl和50～60g的甲基纤维醚加入到1L纯化水中，充分搅拌至完全溶解制备而成。 8.如权利要求1～6任一项所述的检测血清中幽门螺旋杆菌抗体含量的试剂盒的使用方法，其特征在于：包括以下步骤： Sd1：取三支试管分别加30μL所述校准品、30μL所述质控品、30μL待测样本； Sd2：向每支试管中加入30μL抗试剂A和30μL抗试剂B，用塑料薄膜覆盖试管，轻轻振荡试管30s，置于37℃下水浴5min； Sd3：再向每支试管中加入30μL磁微粒试剂，用塑料薄膜覆盖试管，轻轻振荡试管30s，置37℃下水浴5min； Sd4：将所有试管在磁分离器上沉淀3min，缓慢地倒转所述试管和所述磁分离器，倒出上清液；把倒转的所述试管连同所述磁分离器一起，放在滤纸上，拍击所述磁分离器底部除去粘在管壁上的所有液滴； Sd5：向每支试管中加入300μL所述清洗液，用塑料薄膜覆盖试管，轻轻振荡试管30s，混匀后缓慢的倒转试管和磁分离器，倒出上清液，把倒转的所述试管连同所述磁分离器一起，放在滤纸上，用力拍击分离器底部以除去粘在管壁上的所有液滴； Sd6：向每支试管中加入200μL所述发光底物，振荡混匀3s，用化学发光仪检测发光强度。 9.根据权利要求8所述的检测血清中幽门螺旋杆菌抗体含量的试剂盒的使用方法，其特征在于：Sd2的操作中还向每支试管中加入对应试管中溶液重量0.01～0.5％表面活性剂；所述表面活性剂为Tween20、TritonX-100、Bronidox中的一种或多种。 10.根据权利要求8或9所述的检测血清中幽门螺旋杆菌抗体含量的试剂盒的使用方法，其特征在于：Sd5的操作后还包括Sd5.1：重复Sd5的操作1～3次。
所属类别：	发明专利