详情

原文传递一种定量检测谷胱甘肽还原酶的ELISA试剂盒及其检测方法

专利名称：	一种定量检测谷胱甘肽还原酶的ELISA试剂盒及其检测方法
摘要：	本发明涉及多肽化学和免疫学领域技术领域，具体是公开了一种定量检测谷胱甘肽还原酶的ELISA试剂盒，所述试剂盒通过双抗体夹心法检测所述人GR的含量，所述试剂盒包括包被板、校准品、结合抗体、酶结合物、质控品、显色剂A、显色剂B、终止液和浓缩洗涤液；所述包被板包被有GR包被抗体，所述GR包被抗体来源于GR抗原，所述GR抗原是通过使所述人GR抗原表位肽(1)和(2)中的一者与载体蛋白偶联制备而成的，所述结合抗体是由GR抗原制备而成的。本发明克服了现有技术的不足，该试剂盒操作简便、快速，并且检测准确度和精密度好、特异性高、灵敏度好、稳定性好，能够迅速及时地帮助诊断病情，监测预后。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	安徽;34
申请人：	安徽恩禾生物技术有限公司
发明人：	余旭亮
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-23T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-19T00:00:00+0800
申请号：	CN201910785476.3
公开号：	CN110470847A
代理机构：	合肥律众知识产权代理有限公司
代理人：	刘苗
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	230000 安徽省合肥市高新区创新大道106号明珠产业园5#5层D区
主权项：	1.一种定量检测谷胱甘肽还原酶的ELISA试剂盒，其特征在于：所述试剂盒通过双抗体夹心法检测所述人GR的含量，所述试剂盒包括包被板、校准品、结合抗体、酶结合物、质控品、显色剂A、显色剂B、终止液和浓缩洗涤液；所述包被板包被有GR包被抗体，所述GR包被抗体来源于GR抗原，所述GR抗原是通过使所述人GR抗原表位肽(1)和(2)中的一者与载体蛋白偶联制备而成的，所述结合抗体是由GR抗原制备而成的，所述GR抗原是通过使所述人GR抗原表位肽(1)和(2)中的另一者与载体蛋白偶联制备而成的；所述GR抗原表位肽(1)和(2)的NCBI登录号为AAH69244.1，所述所述GR抗原表位肽(1)和(2)的氨基酸序列分别为： (1)Tyr Glu Leu Gly Ala Arg Ala Ala Val Val Glu Ser His； (2)Tyr Glu Lys Val Val Gly Ile His Met Gln Gly Leu Gly。 2.根据权利要求1所述的一种定量检测谷胱甘肽还原酶的ELISA试剂盒，其特征在于：所述GR包被抗体浓度为0.4ng/L，所述结合抗体为0.2ng/L的兔抗人GR多抗，所述酶结合物为HRP标记的羊抗兔IgG，其浓度为1ng/L。 3.根据权利要求1所述的一种定量检测谷胱甘肽还原酶的ELISA试剂盒，其特征在于：所述显色剂A为10g/L的过氧化脲素溶液，所述显色剂B为2g/L的TMB·2HCl溶液，所述显色剂A和显色剂B的体积比为1:1。 4.根据权利要求1所述的一种定量检测谷胱甘肽还原酶的ELISA试剂盒，其特征在于：所述浓缩洗涤液为25倍浓缩的磷酸缓冲液，所述终止液为2M H2SO4溶液。 5.根据权利要求1所述的一种定量检测谷胱甘肽还原酶的ELISA试剂盒，其特征在于：所述质控品和校准品来自于人体血清，所述质控品的浓度为100ng/L，所述校准品的浓度梯度为120ng/L、80ng/L、40ng/L、20ng/L、10ng/L、0ng/L。 6.一种基于权利要求1-5任意一项所述的试剂盒检测谷胱甘肽还原酶的检测方法，其特征在于：包括以下步骤： 1)洗涤液的配制：将20ml浓缩洗涤液加入500ml的容量瓶中，再加入480ml蒸馏水，振荡使浓缩洗涤液充分溶解。 2)将试剂盒平衡至室温后，将所需的微孔条取出固定于板架上，编好顺序； 3)加样：先加入50ul待测样本/GR校准品/GR质控品，再加入50ul GR结合抗体于相应孔中，轻拍混匀，设空白孔； 4)温育：用封口膜将条板封好，37℃温育30分钟； 5)洗板：取出反应板，甩尽板中液体，每孔注满洗涤液洗板5次，拍干，在洗涤过程中应避免产生气泡； 6)加酶：每孔加入两滴或100ul的GR酶结合物，空白孔不加； 7)温育：用封口膜将条板封好，37℃温育30分钟； 8)洗板：取出反应板，甩尽板中液体，每孔注满洗涤液洗板5次，拍干，在洗涤过程中应避免产生气泡； 9)显色：每孔加入显色剂A、B溶液各一滴或各50ul，充分混匀，置37℃温育15分钟； 10)终止：每孔尽快加入终止液1滴轻拍混匀； 11)测定：用酶标仪以空白对照调零，测定各孔OD.值。 12)质量控制：如果GR最高浓度校准品OD.≥0.8，试验结果为有效。 13)结果计算：以校准品浓度作横坐标，OD.值作纵坐标，以双对数拟合绘制校准曲线。通过待测样本的OD.值可在校准曲线上查出其对应浓度值。
所属类别：	发明专利