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原文传递基于重组皮肤模型的光毒性检测方法

专利名称：	基于重组皮肤模型的光毒性检测方法
摘要：	本发明提供一种基于重组皮肤模型的光毒性检测方法，其中，所述方法包括以下步骤：S1.接收和复苏重组皮肤模型；S2.选取光源；S3.确定重组皮肤模型的最大耐受剂量；S4.检测受试物光毒性。本发明基于重组皮肤模型的光毒性检测方法，不仅能够检测水溶性的化学品和化妆品原料，还能检测油状、膏状的化妆品成品和不同比例的配方物质，本发明基于重组皮肤模型的光毒性检测方法不仅模拟了人体皮肤对不同类外源性物质的生物反应变化，同时扩大了待测物质的检测范围，不再局限于水溶性的化学物质，还包括了各种性状的化妆品成品和配方。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	广东博溪生物科技有限公司
发明人：	王丹丹;李潇;张艳云;胡成虎
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-26T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-22T00:00:00+0800
申请号：	CN201910788374.7
公开号：	CN110487997A
分类号：	G01N33/50(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	523808 广东省东莞市松山湖高新技术产业开发区台湾高科技园桃园路1号莞台生物技术合作中心1栋1楼08室
主权项：	1.一种基于重组皮肤模型的光毒性检测方法，其中，所述方法包括以下步骤： S1.接收和复苏重组皮肤模型； S2.选取光源； S3.确定重组皮肤模型的最大耐受剂量； S4.检测受试物光毒性。 2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述接收和复苏重组皮肤模型包括：在6孔板中培养重组皮肤模型，每孔中1个重组皮肤模型，每孔添加900μL复苏液，在温度为36-38℃、相对湿度为92-95%和4-6%CO2的培养箱中孵育55-65min后，更换复苏液，过夜孵育18-22h，在复苏过程中，将损坏的以及表面上存在大量水分的重组皮肤模型丢弃，复苏结束后对重组皮肤模型表观进行评价，表观正常后进行后续操作。 3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述光源为波长为320-400nm的UVA。 4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述UVA的剂量为0.5-60J/cm2。 5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述UVA的最高剂量照射时间为120min以下。 6.根据权利要求1所述的方法，其中，所述确定重组皮肤模型的最大耐受剂量包括：使用UVA照射结束后，将重组皮肤模型在在温度为36-38℃、相对湿度为92-95%和4-6%CO2的培养箱中孵育22h，利用苏木精-伊红染色法检测重组皮肤模型形态学变化，利用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法检测重组皮肤模型组织活力变化，选取形态学无明显变化，组织活力在75%以上的最大辐照剂量作为重组皮肤模型的最大耐受剂量。 7.根据权利要求1所述的方法，其中，所述检测受试物光毒性包括： 1）将步骤S1复苏后的表观正常的重组皮肤模型分为UV+组和UV-组； 2）UV+组和UV-组分别设置空白对照组、阳性对照组、阴性对照组和受试物组； 3）按照分组分别进行重组皮肤模型表面给药，给药体积为25-80μL，给药时间为2h，然后用磷酸盐缓冲液将重组皮肤模型表面残留的液体清洗干净，并用棉签将重组皮肤模型表面擦干，将重组皮肤模型转移至24孔板中，每孔培养液的体积为0.5-1mL； 4）将UV+组进行步骤S3测得的最大UVA耐受剂量照射，将UV-组置于相同环境的黑暗条件下，待UV+组照射完毕后，将UV+组和UV-组的所有重组皮肤模型转移至含有3.3-3.7mL培养液的6孔板中后孵育22h； 5）检测各组的组织活力，判断各组潜在的光毒性。 8.根据权利要求1所述的方法，其中，所述受试物包括水溶性的化学品、化妆品原料、油状或膏状的化妆品成品和不同比例的配方物质。 9.根据权利要求2所述的方法，其中，所述表观正常表现为重组皮肤模型表面无气泡、无褶皱、不潮湿。 10.重组皮肤模型在制备光毒性检测试剂盒中的用途。
所属类别：	发明专利