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原文传递一种Fe3O4-Au抗体纳米磁珠及其制备方法与应用

专利名称：	一种Fe3O4-Au抗体纳米磁珠及其制备方法与应用
摘要：	本发明公开了一种Fe3O4‑Au抗体纳米磁珠及其制备方法与应用。其中所述的Fe3O4抗体纳米磁珠的制备方法为Fe3O4溶液由聚二烯丙基二甲基氯化铵修饰，AuNPs静电吸附到聚二烯丙基二甲基氯化铵修饰后的Fe3O4上，得到Fe3O4‑Au，微管相关蛋白轻链3B抗体共价结合到修饰后的Fe3O4‑Au上，即得。本发明所提供的Fe3O4‑Au抗体纳米磁珠填补了目前富集纯化分泌型自噬小体的空缺，其不需要对样品进行的复杂处理，有优异的抗干扰性能，对分泌型自噬小体具有很高的选择性；另外，Fe3O4‑Au抗体纳米磁珠在富集纯化分泌型自噬小体的应用，具有富集效率高、产物纯度高，操作简便的优势。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	东南大学
发明人：	王立新;沈艳飞;张越
专利状态：	有效
申请日期：	2019-09-26T00:00:00+0800
发布日期：	2019-12-31T00:00:00+0800
申请号：	CN201910916384.4
公开号：	CN110632295A
代理机构：	南京苏高专利商标事务所(普通合伙)
代理人：	肖明芳
分类号：	G01N33/543(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	211102 江苏省南京市江宁区东南大学路2号
主权项：	1.一种Fe3O4-Au抗体纳米磁珠的制备方法，其特征在于，Fe3O4溶液由聚二烯丙基二甲基氯化铵修饰，AuNPs静电吸附到聚二烯丙基二甲基氯化铵修饰后的Fe3O4上，得到Fe3O4-Au，微管相关蛋白轻链3B抗体共价结合到修饰后的Fe3O4-Au上，即得。 2.根据权利要求1所述Fe3O4-Au抗体纳米磁珠的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： 1)Fe3O4-Au的制备：将Fe3O4溶液与聚二烯丙基二甲基氯化铵混合震荡10～40min，离心得到沉淀物，将沉淀物水洗，按每克湿沉淀物重悬于0.8～1.5mL水中，加入AuNPs室温混合震荡5～10h，离心得到沉淀物，将沉淀物水洗，重悬于水，得到Fe3O4-Au溶液； 2)Fe3O4-Au抗体纳米磁珠的制备：将步骤1)制备得到的Fe3O4-Au溶液加入到4-巯基丁酸中，室温震荡10～24h；磁性分离，水洗，重悬于水，加入1-丁硫醇，室温振荡40～80min；磁性分离，水洗，重悬于PBS；加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐/氮羟基琥珀酰亚胺溶液室温振荡100～160min，磁性分离，PBS洗，按每克湿沉淀物重悬于0.8～1.5mLPBS中；加入LC3B抗体，2～10℃振荡10～24h；加入BSA，2～10℃搅拌40～80min，磁性分离，PBS洗，重悬于PBS，获得Fe3O4-Au抗体纳米磁珠溶液。 3.根据权利要求1或2所述Fe3O4-Au抗体纳米磁珠的制备方法，其特征在于，所述Fe3O4溶液的制备方法如下：将FeCl3与柠檬酸钠溶于乙二醇，随后加入乙酸钠，搅拌10～40min，倒入反应釜中，反应制备Fe3O4溶液。 4.根据权利要求3所述Fe3O4-Au抗体纳米磁珠的制备方法，其特征在于，所述FeCl3与柠檬酸钠的质量比为2:1～4:1，控制乙二醇的用量使得FeCl3浓度为0.01～0.05g/mL，FeCl3与乙酸钠的质量比为1:1～1:4，搅拌速率为400～1000r/min，反应温度为180～220℃，反应时间为6～12h；反应结束后物料经离心后得到第一沉淀物，第一沉淀物水洗后离心得到第二沉淀物，第二沉淀物乙醇洗后得到溶于乙醇的液体，即为Fe3O4溶液；所述Fe3O4溶液的浓度为0.5～2mg/mL，pH值为8.0～10.0。 5.根据权利要求1或2所述Fe3O4-Au抗体纳米磁珠的制备方法，其特征在于，所述AuNPs的制备方法如下：将HAuCl4溶液加热至沸腾，搅拌下加入柠檬酸钠溶液，继续加热煮沸10～30min，冷却，制备AuNPs溶液；其中，所述HAuCl4溶液的溶剂为水，质量百分比为0.005％～0.02％；所述柠檬酸钠溶液的溶剂为水，质量百分比为0.05％～2％；HAuCl4溶液与柠檬酸钠溶液的体积比为55:1～40:1。 6.根据权利要求2所述Fe3O4-Au抗体纳米磁珠的制备方法，其特征在于，步骤1)中，所述聚二烯丙基二甲基氯化铵的质量百分比为2％～5％；Fe3O4溶液与聚二烯丙基二甲基氯化铵的体积比为1:0.6～1:0.2；所述AuNPs的pH值为6.5～7.8；Fe3O4溶液与AuNPs的体积比为1:6～1:15；所述Fe3O4-Au溶液的浓度为0.5～2mg/mL。 7.根据权利要求2所述Fe3O4-Au抗体纳米磁珠的制备方法，其特征在于，步骤2)中，所述4-巯基丁酸的浓度为0.8～1.2mM，Fe3O4-Au溶液与4-巯基丁酸的体积比为6000:1～4000:1；所述1-丁硫醇的浓度为0.8～1.2mM，Fe3O4-Au溶液与1-丁硫醇的体积比为6000:1～4000:1；所述1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐/氮羟基琥珀酰亚胺溶液中1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐的浓度为15～30mg/mL，氮羟基琥珀酰亚胺的浓度为5～15mg/mL，溶剂为pH＝6.0的PBS，Fe3O4-Au溶液与1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐/氮羟基琥珀酰亚胺溶液的体积比为1:0.8～1:1.5；所述LC3B抗体的浓度为0.8～1.2mg/mL，Fe3O4-Au溶液与LC3B抗体的体积比为50:1～200:1；所述BSA的质量百分比为0.2％～2％；所述的磁性分离为用磁铁吸引磁性纳米颗粒Fe3O4-Au-LC3B抗体复合物。 8.权利要求1或2所述的制备方法制备得到的Fe3O4-Au抗体纳米磁珠。 9.权利要求8所述Fe3O4-Au抗体纳米磁珠在富集纯化分泌型自噬小体中的应用。 10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，包括如下步骤：将Fe3O4-Au抗体纳米磁珠溶液滴加于自噬小体溶液，20～50℃反应10～120min，然后用PBS溶液清洗并重悬于PBS，磁性富集捕获自噬小体。
所属类别：	发明专利