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原文传递一种同时检测待测样品中大肠杆菌和沙门氏菌的含量的方法

专利名称：	一种同时检测待测样品中大肠杆菌和沙门氏菌的含量的方法
摘要：	本发明公开了一种同时检测待测样品中大肠杆菌和沙门氏菌的含量的方法。该方法依次包括如下步骤：(1)向待测样品中加入过量的大肠杆菌捕获探针和过量的沙门氏菌捕获探针，孵育；(2)加入过量的大肠杆菌信号探针和过量的沙门氏菌信号探针，孵育；(3)SERS检测拉曼信号强度；(4)将该拉曼信号强度代入根据标准溶液中大肠杆菌O157:H7和沙门氏菌的浓度的Lg值和相应拉曼信号强度绘制标准曲线，得到待测样品中大肠杆菌O157:H7和沙门氏菌的含量。实验证明，该方法可以同时检测待测食品中大肠杆菌O157:H7和沙门氏菌的含量且具有较高的准确性。本发明具有重要的应用价值。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	中国农业科学院农产品加工研究所
发明人：	郑金铠;李玉芝;陆畅;周帅帅;高飞
专利状态：	有效
申请日期：	2019-10-30T00:00:00+0800
发布日期：	2019-12-31T00:00:00+0800
申请号：	CN201911043414.1
公开号：	CN110632302A
代理机构：	北京纪凯知识产权代理有限公司
代理人：	闫书宁
分类号：	G01N33/569(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	100089 北京市海淀区圆明园西路2号农产品加工研究所
主权项：	1.一种检测待测样品中不同细菌含量的试剂盒甲，包括若干个用于检测不同细菌的试剂甲；每个用于检测细菌的试剂甲包括细菌抗体、单链DNA分子和拉曼信号报告物；所述单链DNA分子从5’末端到3’末端依次包括DNA片段1和DNA片段2；所述DNA片段1由N个T、C或A组成，N为16以上的自然数；所述DNA片段2为所述细菌的适配体DNA；每个用于检测细菌的试剂甲中，所述细菌抗体、所述DNA片段2和所述拉曼信号报告物均不同，用于检测不同的细菌。 2.如权利要求1所述试剂盒甲，其特征在于：所述试剂盒甲还包括化合物B、可与所述化合物B结合的化合物A和金纳米材料。 3.一种检测待测样品中不同细菌含量的试剂盒乙，包括若干个用于检测不同细菌的试剂乙；每个用于检测细菌的试剂乙包括化合物B修饰的细菌抗体、可与所述化合物B结合的化合物A修饰的纳米微球和信号探针；所述信号探针为单链DNA分子和拉曼信号报告物共同标记的金纳米材料；所述单链DNA分子从5’末端到3’末端依次包括DNA片段1和DNA片段2；所述DNA片段1由N个T、C或A组成，N为16以上的自然数；所述DNA片段2为所述细菌的适配体DNA；每个用于检测细菌的试剂乙中，所述化合物B修饰的细菌抗体、所述可与化合物B结合的化合物A修饰的纳米微球和所述信号探针均不同，用于检测不同的细菌。 4.如权利要求3所述试剂盒乙，其特征在于：所述信号探针的制备方法为：将金纳米材料、单链DNA分子和拉曼信号报告物混合，避光反应；然后加入氯金酸和羟胺盐酸盐，反应，沉淀即为信号探针。 5.如权利要求1或2所述试剂盒甲、或、权利要求3或4所述试剂盒乙，其特征在于：所述细菌抗体为细菌的单克隆抗体或细菌的多克隆抗体。 6.如权利要求1、2或5所述试剂盒甲、或、权利要求3至5任一所述的试剂盒乙，其特征在于：所述化合物B为生物素；所述化合物A为亲和素。 7.一种检测待测样品中不同细菌含量的方法，包括步骤(a)、步骤(b)、步骤(c)和步骤(d)：所述步骤(a)包括如下步骤： (a-1)将细菌抗体进行化合物B修饰，得到化合物B修饰的细菌抗体；将纳米微球进行可与所述化合物B结合的化合物A修饰，得到化合物A修饰的纳米微球；将化合物B修饰的细菌抗体和化合物A修饰的纳米微球进行连接，得到捕获探针； (a-2)按照步骤(a-1)的方法，制备不同的捕获探针；不同的捕获探针组成捕获探针组；捕获探针组中每个捕获探针用于捕获一种细菌； (a-3)将金纳米材料、单链DNA分子和拉曼信号报告物混合，避光反应；然后加入氯金酸和羟胺盐酸盐，反应，收集沉淀；沉淀即为信号探针；所述单链DNA分子从5’末端到3’末端依次包括DNA片段1和DNA片段2；所述DNA片段1由N个T、C或A组成，N为16以上的自然数；所述DNA片段2为细菌的适配体DNA； (a-4)按照步骤(a-3)的方法，制备不同的信号探针；不同的信号探针组成信号探针组；信号探针组中每个信号探针用于检测一种细菌；所述步骤(b)包括如下步骤： (b-1)向待测样品中加入过量的捕获探针组，孵育； (b-2)完成步骤(b-1)后，加入过量的信号探针组，孵育； (b-3)完成步骤(b-2)后，SERS检测拉曼信号强度；所述步骤(c)包括如下步骤： (c-1)向细菌标准溶液加入过量的捕获探针组，孵育； (c-2)完成步骤(c-1)后，加入过量的信号探针组，孵育； (c-3)完成步骤(c-2)后，SERS检测拉曼信号强度；所述步骤(d)：根据细菌标准溶液中的各个细菌浓度和相应拉曼信号强度绘制标准曲线，将所述步骤(b-3)得到的拉曼信号强度代入所述标准曲线，得到待测样品中各个细菌的含量。 8.一种检测待测样品中大肠杆菌O157:H7和沙门氏菌含量的方法，包括步骤(1)、步骤(2)、步骤(3)和步骤(4)：所述步骤(1)包括如下步骤： (1-1)将大肠杆菌O157:H7单克隆抗体进行化合物B修饰，得到化合物B修饰的大肠杆菌O157:H7单克隆抗体；将纳米微球进行可与所述化合物B结合的化合物A修饰，得到化合物A修饰的纳米微球；将化合物B修饰的大肠杆菌O157:H7单克隆抗体和化合物A修饰的纳米微球进行连接，得到大肠杆菌捕获探针； (1-2)将沙门氏菌单克隆抗体进行化合物B修饰，得到化合物B修饰的沙门氏菌单克隆抗体；将化合物B修饰的沙门氏菌单克隆抗体和化合物A修饰的纳米微球进行连接，得到沙门氏菌捕获探针； (1-3)将金纳米材料、单链DNA分子甲和拉曼信号报告物甲混合，避光反应；然后加入氯金酸和羟胺盐酸盐，反应，收集沉淀；沉淀即为大肠杆菌信号探针；所述单链DNA分子甲从5’末端到3’末端依次包括DNA片段3和DNA片段4；所述DNA片段3由N个T、C或A组成，N为16以上的自然数；所述DNA片段4的核苷酸序列如SEQ ID NO.1自5’末端起第21至62位所示； (1-4)将金纳米材料、单链DNA分子乙和拉曼信号报告物乙混合，避光反应；然后加入氯金酸和羟胺盐酸盐，反应，收集沉淀；沉淀即为沙门氏菌信号探针；所述单链DNA分子乙从5’末端到3’末端依次包括DNA片段5和DNA片段6；所述DNA片段5由N个T、C或A组成，N为16以上的自然数；所述DNA片段6的核苷酸序列如SEQ ID NO.2自5’末端起第21至60位所示；所述步骤(2)包括如下步骤： (2-1)向待测样品中加入过量的大肠杆菌捕获探针和过量的沙门氏菌捕获探针，孵育； (2-2)完成步骤(2-1)后，加入过量的大肠杆菌信号探针和过量的沙门氏菌信号探针，孵育； (2-3)完成步骤(2-2)后，SERS检测拉曼信号强度；所述步骤(3)包括如下步骤： (3-1)向大肠杆菌O157:H7和沙门氏菌的标准溶液加入过量的大肠杆菌捕获探针和过量的沙门氏菌捕获探针，孵育； (3-2)完成步骤(3-1)后，加入过量的大肠杆菌信号探针和过量的沙门氏菌信号探针，孵育； (3-3)完成步骤(3-2)后，SERS检测拉曼信号强度；所述步骤(4)：根据标准溶液中大肠杆菌O157:H7和沙门氏菌的浓度和相应拉曼信号强度绘制标准曲线，将所述步骤(2-3)得到的拉曼信号强度代入所述标准曲线，得到待测样品中大肠杆菌O157:H7和沙门氏菌的含量。 9.一种检测待测样品中大肠杆菌O157:H7含量的方法，包括步骤(f)、步骤(g)、步骤(h)和步骤(i)：所述步骤(f)包括如下步骤： (f-1)将大肠杆菌O157:H7单克隆抗体进行化合物B修饰，得到化合物B修饰的大肠杆菌O157:H7单克隆抗体；将纳米微球进行可与所述化合物B结合的化合物A修饰，得到化合物A修饰的纳米微球；将化合物B修饰的大肠杆菌O157:H7单克隆抗体和化合物A修饰的纳米微球进行连接，得到大肠杆菌捕获探针； (f-2)将金纳米材料、单链DNA分子甲和拉曼信号报告物甲混合，避光反应；然后加入氯金酸和羟胺盐酸盐，反应，收集沉淀；沉淀即为大肠杆菌信号探针；所述单链DNA分子甲从5’末端到3’末端依次包括DNA片段3和DNA片段4；所述DNA片段3由N个T、C或A组成，N为16以上的自然数；所述DNA片段4的核苷酸序列如SEQ ID NO.1自5’末端起第21至62位所示；所述步骤(g)包括如下步骤： (g-1)向待测样品中加入过量的大肠杆菌捕获探针，孵育； (g-2)完成步骤(g-1)后，加入过量的大肠杆菌信号探针，孵育； (g-3)完成步骤(g-2)后，SERS检测拉曼信号强度；所述步骤(h)包括如下步骤： (h-1)向大肠杆菌O157:H7标准溶液加入过量的大肠杆菌捕获探针，孵育； (h-2)完成步骤(h-1)后，加入过量的大肠杆菌信号探针，孵育； (h-3)完成步骤(h-2)后，SERS检测拉曼信号强度；所述步骤(i)：根据大肠杆菌O157:H7标准溶液中大肠杆菌O157:H7的浓度和相应拉曼信号强度绘制标准曲线，将所述步骤(g-3)得到的拉曼信号强度代入所述标准曲线，得到待测样品中大肠杆菌O157:H7的含量。 10.一种检测待测样品中沙门氏菌含量的方法，包括步骤(o)、步骤(p)、步骤(q)和步骤(r)：所述步骤(o)包括如下步骤： (o-1)将沙门氏菌单克隆抗体进行化合物B修饰，得到化合物B修饰的沙门氏菌单克隆抗体；将纳米微球进行可与所述化合物B结合的化合物A修饰，得到化合物A修饰的纳米微球；将化合物B修饰的沙门氏菌单克隆抗体和化合物A修饰的纳米微球进行连接，得到沙门氏菌捕获探针； (o-2)将金纳米材料、单链DNA分子乙和拉曼信号报告物乙混合，避光反应；然后加入氯金酸和羟胺盐酸盐，反应，收集沉淀；沉淀即为沙门氏菌信号探针；所述单链DNA分子乙从5’末端到3’末端依次包括DNA片段5和DNA片段6；所述DNA片段5由N个T、C或A组成，N为16以上的自然数；所述DNA片段6的核苷酸序列如SEQ ID NO.2自5’末端起第21至60位所示；所述步骤(p)包括如下步骤： (p-1)向待测样品中加入过量的沙门氏菌捕获探针，孵育； (p-2)完成步骤(p-1)后，加入过量的沙门氏菌信号探针，孵育； (p-3)完成步骤(p-2)后，SERS检测拉曼信号强度；所述步骤(q)包括如下步骤： (q-1)向沙门氏菌标准溶液加入过量的沙门氏菌捕获探针，孵育； (q-2)完成步骤(q-1)后，加入过量的沙门氏菌信号探针，孵育； (q-3)完成步骤(q-2)后，SERS检测拉曼信号强度；所述步骤(r)：根据沙门氏菌标准溶液中沙门氏菌的浓度和相应拉曼信号强度绘制标准曲线，将所述步骤(p-3)得到的拉曼信号强度代入所述标准曲线，得到待测样品中沙门氏菌的含量。
所属类别：	发明专利