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原文传递一种用流式细胞仪计数并分选荧光标记微塑料颗粒的方法

专利名称：	一种用流式细胞仪计数并分选荧光标记微塑料颗粒的方法
摘要：	本发明提出了一种用流式细胞仪计数并分选荧光标记微塑料颗粒的方法，将微塑料悬浮液浓缩、过滤后加入偶联剂反应，染色，采用流式细胞仪计数并分选；所述染色剂为藻蓝蛋白溶液或藻红蛋白溶液。本发明将染色剂藻蓝蛋白或藻红蛋白和其他染色剂进行复配，两者可以进行一定程度的结合，具有增强荧光显色度的效果，增强了其应用性。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	浙江;33
申请人：	浙江海洋大学
发明人：	樊英萍;王健鑫;刘雪珠
专利状态：	有效
申请日期：	2019-09-29T00:00:00+0800
发布日期：	2019-12-31T00:00:00+0800
申请号：	CN201910929714.3
公开号：	CN110632051A
代理机构：	杭州浙科专利事务所(普通合伙)
代理人：	吴秉中
分类号：	G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	316000 浙江省舟山市普陀区海洋科技产业园普陀展茅晓辉工业区c2—10地块
主权项：	1.一种用流式细胞仪计数并分选荧光标记微塑料颗粒的方法，其特征在于，将微塑料悬浮液浓缩、过滤后加入偶联剂反应，染色，采用流式细胞仪计数并分选；所述染色剂为藻蓝蛋白溶液或藻红蛋白溶液。 2.根据权利要求1所述一种用流式细胞仪计数并分选荧光标记微塑料颗粒的方法，其特征在于，所述藻蓝蛋白溶液或藻红蛋白溶液中藻蓝蛋白溶液或藻红蛋白的质量分数为0.5-1wt%。 3.根据权利要求1所述一种用流式细胞仪计数并分选荧光标记微塑料颗粒的方法，其特征在于，具体包括以下步骤： S1. 样品制备：对微塑料悬浊液样品进行浓缩，用细胞滤膜过滤除去100μm以上不便于利用流式细胞仪的较大尺寸颗粒物，加入偶联剂，反应1-2h；配置藻蓝蛋白溶液或藻红蛋白溶液，加入经前步处理的微塑料悬浊液中对微塑料颗粒进行染色； S2. 流式细胞仪检测：开机预热并例行检查后，排除管路中气泡；检测阴性对照除去空白，检测单阳管，根据仪器或实验要求选择适合流速，按设置顺序上样获取数据，数据分析。 4.根据权利要求3所述一种用流式细胞仪计数并分选荧光标记微塑料颗粒的方法，其特征在于，所述染色条件为采用超声波震荡仪将混合液震荡混匀后静置10min，离心，弃除上清液；所述超声波震荡仪的功率为1000-1200W；所述离心条件为离心转速为10000-15000r/min，离心时间为10-20min。 5.根据权利要求3所述一种用流式细胞仪计数并分选荧光标记微塑料颗粒的方法，其特征在于，所述藻蓝蛋白溶液或藻红蛋白溶液与微塑料悬浊液的体积比为1：（80-120）。 6.根据权利要求3所述一种用流式细胞仪计数并分选荧光标记微塑料颗粒的方法，其特征在于，所述微塑料悬浊液的密度为2.2-2.7g/cm3，采用悬浮法密度计测定。 7.根据权利要求3所述一种用流式细胞仪计数并分选荧光标记微塑料颗粒的方法，其特征在于，所述偶联剂为硅烷偶联剂，添加后溶液偶联剂的质量分数为0.1-0.2wt%。 8.根据权利要求1-7任一项权利要求所述一种用流式细胞仪计数并分选荧光标记微塑料颗粒的方法，其特征在于，所述藻蓝蛋白溶液或藻红蛋白溶液由藻蓝蛋白或藻红蛋白与其他染色剂的复合物溶液替换，所述藻蓝蛋白或藻红蛋白与其他染色剂的复合物溶液由以下方法制备：将其他染色剂配置成溶液，与藻蓝蛋白或藻红蛋白溶液等体积混合。 9.根据权利要求8所述一种用流式细胞仪计数并分选荧光标记微塑料颗粒的方法，其特征在于，所述其他染色剂选自苯胺蓝、亮绿、甲基绿中的一种。 10.根据权利要求8所述一种用流式细胞仪计数并分选荧光标记微塑料颗粒的方法，其特征在于，所述其他染色剂溶液中其他染色剂的质量分数为1-2wt%。
所属类别：	发明专利