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原文传递一种快速检测阪崎克罗诺杆菌的增敏试纸条及其应用

专利名称：	一种快速检测阪崎克罗诺杆菌的增敏试纸条及其应用
摘要：	本发明公开了一种快速检测阪崎克罗诺杆菌的增敏试纸条及其应用，属于阪崎克罗诺杆菌检测技术领域。本发明增敏试纸条包括样品垫，金标垫，NC膜，吸水垫和底板，其中：NC膜上设有检测线和控制线，控制线上包被有羊抗鼠二抗，检测线上包被的检测线溶液是通过将胶体金与抗阪崎克罗诺杆菌捕获抗体进行孵育获得的。本发明试纸条具有可提高NC膜上蛋白质结合量的特点，进而增强捕获率，而且在检测线处加入的胶体金可以提高聚集显色，从而提高检测效果，较传统试纸条灵敏度提高了100倍，特异性强，检测时间短，制作简便且成本低，方便携带，适用于现场检测阪崎克罗诺杆菌。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	黑龙江;23
申请人：	东北农业大学
发明人：	潘瑞丽;党芳芳;王蕊;孙露宏;付世骞;姜毓君;满朝新
专利状态：	有效
申请日期：	2017-10-16T00:00:00+0800
发布日期：	2019-04-23T00:00:00+0800
申请号：	CN201710957730.4
公开号：	CN109669039A
代理机构：	哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司
代理人：	邓宇
分类号：	G01N33/569(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	150030 黑龙江省哈尔滨市香坊区木材街59号
主权项：	1.一种快速检测阪崎克罗诺杆菌的增敏试纸条，所述增敏试纸条包括样品垫，金标垫，NC膜，吸水垫和底板，其中：NC膜上设有检测线和控制线，其特征在于，所述控制线上包被有羊抗鼠二抗；所述检测线上包被的检测线溶液是通过将胶体金与抗阪崎克罗诺杆菌捕获抗体进行孵育获得的。 2.根据权利要求1所述的增敏试纸条，其特征在于，所述检测线溶液中胶体金的浓度为20PM-80PM，抗阪崎克罗诺杆菌捕获抗体的浓度为1.4mg/mL-2.6mg/mL。 3.根据权利要求1所述的增敏试纸条，其特征在于，所述检测线溶液中胶体金浓度为60PM，抗阪崎克罗诺杆菌捕获抗体浓度为2.2mg/mL。 4.根据权利要求1所述的增敏试纸条，其特征在于，所述孵育的温度为4℃；所述孵育时间为1h。 5.根据权利要求1所述的增敏试纸条，其特征在于，所述检测线溶液中所用的胶体金是通过将胶体金溶液离心、然后用pH为9的10mM Tirs/HCl复溶获得的。 6.根据权利要求1所述的增敏试纸条，其特征在于，所述胶体金的粒径为35nm。 7.根据权利要求1所述的增敏试纸条，其特征在于，所述金标垫的制备方法为：每1mL胶体金溶液加入碳酸钾调节溶液PH值后加入抗阪崎克罗诺杆菌检测抗体10ug，混匀，室温静置反应1h以上后，加入封闭剂100uL 10％BSA，混匀，室温静置反应1h以上，离心后去掉上清，加150uL复溶液及2uL 10％BSA沉淀并混匀即得金标溶液，将金标溶液以15uL/cm的速度均匀涂在结合垫上，于37℃干燥1h即得金标垫。 8.权利要求1-7任一所述的增敏试纸条在检测阪崎克罗诺杆菌中的应用。 9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，将100uL待检测样品滴加于权利要求1-7任一所述增敏试纸条的样品垫上，15min后观察检测结果；检测结果的判定方法为：若增敏试纸条的检测线、控制线都出现红色条带，表明待检测样品中含有阪崎克罗诺杆菌，阳性结果；若检测线未出现红色条带，控制线出现红色条带，表明待检测样品中不含有阪崎克罗诺杆菌，阴性结果；若控制线未出现红色条带，表明试纸条失效。 10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述待检测样品为乳粉时，其前处理方法为将10g乳粉溶解于90mL 0.85％生理盐水中，5000rpm离心5min去掉上层奶皮、脂质层及上清，再次溶解于生理盐水中，进行二次离心，去掉剩余的奶皮及脂质层，加入生理盐水复溶，用于检测。
所属类别：	发明专利