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一种基于MADLI-TOF MS直接鉴定菌液中克罗诺杆菌的方法
| 专利名称： | 一种基于MADLI-TOF MS直接鉴定菌液中克罗诺杆菌的方法 |
| 摘要： | 一种基于MADLI‑TOF MS直接鉴定菌液中克罗诺杆菌的方法，属于食源性致病菌鉴定技术领域。为了解决现有技术利用MALDI‑TOF MS鉴定克罗诺杆菌均采用固体点样方式，易造成鉴定结果的误差，需要多菌落形成单元的技术问题，本发明提供了一种基于MADLI‑TOF MS直接鉴定菌液中克罗诺杆菌的方法，该方法将生长至对数期的菌液离心获得菌泥，添加甲酸溶液进行超声处理，然后添加乙腈混匀，离心后的上清作为前处理点样液进行MADLI‑TOF MS检测。该方法可避免传统MALDI‑TOF MS固体点样方法所造成的重复性差、无法定量、适用性差的问题，可应用于多种来源的阪崎克罗诺杆菌鉴定。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 黑龙江;23 |
| 申请人： | 东北农业大学 |
| 发明人： | 姜毓君;满朝新;宋丹靓敏;杨鑫焱;贾嫒 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2022-09-02T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2022-12-27T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN202211072069.6 |
| 公开号： | CN115524389A |
| 代理机构： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 |
| 代理人： | 邓宇 |
| 分类号： | G01N27/64;G;G01;G01N;G01N27;G01N27/64 |
| 申请人地址： | 150030 黑龙江省哈尔滨市香坊区长江路600号 |
| 主权项： | 1.一种基于MADLI-TOF MS直接鉴定菌液中克罗诺杆菌的方法，其特征在于，包括如下步骤： S1、将待测菌液培养至对数期，对菌液进行离心处理，收集下层菌泥，使用质量分数为0.85％的NaCl溶液重悬菌泥，离心弃上清，获得下层菌泥，再次使用质量分数为0.85％的NaCl溶液重悬菌泥，离心后获得下层菌泥； S2、向S1获得的菌泥中加入体积分数为70％的甲酸溶液，进行超声处理； S3、加入乙腈溶液，涡旋混合后获得前处理液体； S4、对前处理液体进行离心，取上清液，得到前处理点样液备用； S5、利用MADLI-TOF MS仪器对前处理点样液进行鉴定，将采集到的谱图数据导入QuanID DB数据库进行比对，通过对比质荷比和特征峰得到鉴定结果。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S1所述对数期的菌体浓度为108CFU/mL。 3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S1所述离心条件为12000rpm，2min。 4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S2所述甲酸的添加量为20μL。 5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S2所述超声的功率为300W。 6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S2所述超声的时间为2min。 7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S3所述乙腈的添加量为75μL。 8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S3所述涡旋混合时间为2min。 9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S4所述离心条件为12000rpm，2min。 10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S5所述MADLI-TOF MS仪器参数设置为采集条件5uJ，激光频率5000Hz，检测器电压-0.56kV，聚焦质量：10000u。 |
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