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原文传递一种同时检测食品中24种食品源性兴奋剂的方法

专利名称：	一种同时检测食品中24种食品源性兴奋剂的方法
摘要：	本发明提供了一种同时检测食品中24种食品源性兴奋剂的样品前处理方法，本发明还提供了一种同时检测食品中24种食品源性兴奋剂的方法。本发明合并了11种β2‑激动剂(沙丁胺醇、莱克多巴胺、特布他林、非诺特罗、妥布特罗、喷布特罗、西马特罗、克仑丙罗、克仑特罗、沙美特罗、齐帕特罗)，4种β‑阻断剂(普萘洛尔、美托洛尔、卡替洛尔、阿替洛尔)，2种蛋白同化剂(脱氢表雄酮、美替诺龙)，1种糖皮质激素(可的松)，6种真菌毒素(泽伦诺、β‑玉米赤霉醇、α‑玉米赤霉烯醇、β‑玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮、玉米赤霉烯酮)共24种食源性兴奋剂。根据它们的物理、化学性质，通过对提取剂、提取时间等考察，建立了通用性强、重现性好、能很好适应复杂基质的食品中24种食源性兴奋剂前处理方法；选择专属性强的液相色谱‑三重串联四极杆质谱联用仪进行测定，最终形成了一个适用性强，灵敏度高，检验结果准确可靠的检测方法，为24种食源性兴奋剂的检测提供有力的技术支撑。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	四川;51
申请人：	成都市食品检验研究院
发明人：	李绍波;宋娟;林浩;刘川;李佳佳;石培育;陈燕秋;刘诗瑶;万渝平;谯斌宗;王义;肖全伟;张敏;戴琴;熊梅瑾;吴文林;左鑫;文星;曹靖雨;程芷萱;张之帆;郭靓;乔秀明;赵红阳;乔煦玮
专利状态：	有效
申请日期：	2023-08-11T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-10T00:00:00+0800
申请号：	CN202311011333.X
公开号：	CN117030909A
代理机构：	成都惠迪专利事务所(普通合伙)
代理人：	全学荣
分类号：	G01N30/06;G01N30/14;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/02;G01N30/04;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/02;G01N30/04
申请人地址：	611135 四川省成都市温江区芙蓉大道二段10号
主权项：	1.一种同时检测食品中24种食品源性兴奋剂的样品前处理方法，其特征在于：它包括如下步骤： a、取待检样品，-18℃以下保存； b、酶解：样品中加入β-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶混合物，酶解； c、提取：加入氯化钠、乙腈溶液，涡旋混匀，超声后离心；取上层溶液于另一离心管中，加入乙腈饱和正己烷溶液，涡旋混匀，于4℃条件下离心，弃去正己烷层，下层溶液备用； d、净化：取c步骤的下层溶液，以低于1mL/min的流速完全通过固相萃取柱，再用乙腈洗脱，收集全部流出液于刻度氮吹管中，45℃氮吹至近干，加入0.1％甲酸甲醇-0.1％甲酸水溶液，超声，涡旋混合溶解残渣并定容至1mL，过有机滤膜，滤液供液相色谱-质谱/质谱仪测定。 2.根据权利要求1所述的前处理方法，其特征在于：所述的24种食品源性兴奋剂分别为： β2-激动剂：沙丁胺醇、莱克多巴胺、特布他林、非诺特罗、妥布特罗、喷布特罗、西马特罗、克仑丙罗、克仑特罗、沙美特罗、齐帕特罗； β-阻断剂：普萘洛尔、美托洛尔、卡替洛尔、阿替洛尔；蛋白同化剂：脱氢表雄酮、美替诺龙；糖皮质激素：可的松；真菌毒素：泽伦诺、β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮、玉米赤霉烯酮。 3.根据权利要求1或2所述的前处理方法，其特征在于：b步骤所述的β-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶混合物中含β-葡萄糖醛酸酶134600U/mL，芳基硫酸酯酶5200U/mL。 4.根据权利要求1或3所述的前处理方法，其特征在于：所述的b步骤酶解前还包括如下处理：将样品2.5～5g置于离心管中，准确加入100μL混合内标标准中间液Ⅱ，加入均质子，乙酸铵缓冲溶液；所述的乙酸铵缓冲溶液是将乙酸铵，加水溶解，用冰醋酸调节pH至5.2±0.1；所述的混合内标标准中间液Ⅱ的制备方法为：准确移取混合同位素内标中间液Ⅰ1mL于10mL容量瓶中，用0.1％甲酸甲醇-0.1％甲酸水溶液定容至刻度，摇匀，配制成浓度为100ng/mL～1000ng/mL的混合同位素内标中间液Ⅱ；所述的混合同位素内标中间液Ⅰ的制备方法为：分别准确移取克仑特罗-D9、克仑丙罗-D7、莱克多巴胺-D6、沙丁胺醇-D3、特布他林-D9、非诺特罗-D6、妥布特罗-D9、喷布特罗-D9、西马特罗-D7、沙美特罗-D3、美替诺龙-D6、普萘洛尔-D7、阿替洛尔-D7、美托洛尔-D7、齐帕特罗-D7、可的松-D8同位素内标储备液(5.4.2)100μL，泽仑诺-D5、β-玉米赤霉醇-D5、α-玉米赤霉烯醇-D5、β-玉米赤霉烯醇-D5、玉米赤霉酮-D6、玉米赤霉烯酮-D6、卡替洛尔-D9同位素内标储备液(5.4.2)500μL，脱氢表雄酮-D2同位素内标储备液1000μL，置于同一10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，配制成浓度为1.00μg/mL～10.0μg/mL的混合同位素内标中间液Ⅰ。 5.根据权利要求1或2所述的前处理方法，其特征在于：d步骤所述的固相萃取柱是通过式反相混合型亲水亲脂平衡共聚物固相萃取柱；所述的0.1％甲酸甲醇-0.1％甲酸水溶液是取300mL0.1％甲酸甲醇溶液，加入0.1％甲酸水溶液700mL，混匀。 6.一种同时检测食品中24种食品源性兴奋剂的方法，其特征在于：它包括如下步骤： a、按权利要求1-5任意一项所述的方法处理待检样品； b、采用高效液相色谱-质谱联用方法检测待检样品，其中，液相色谱条件为：色谱柱：C18色谱柱(3.0×150mm，1.7μm)；流动相：A为0.1％甲酸水溶液，B为0.1％甲酸乙腈溶液；流速：0.4mL/min；柱温：40℃；进样量：5μL；洗脱程序如下表：时间/min 流动相A/％流动相B/％ 0.00 98 2 0.80 98 2 3.00 80 20 4.00 80 20 6.50 45 55 8.50 45 55 10.50 10 90 11.00 2 98 12.00 2 98 12.50 98 2 14.00 98 2 ；所述的质谱条件为：离子源：电喷雾离子源；检测方式：多重反应监测模式(MRM)；离子源温度：400℃；雾化气压力：60psi；辅助气压力：60psi；气帘气压力：20psi；电喷雾电压：4500V；待测物离子源、定性离子对、定量离子对和质谱参数见下表： 7.根据权利要求6所述的同时检测食品中24种食品源性兴奋剂的方法，其特征在于：所述的检测图谱如图1所示。