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原文传递基于双色量子点联合检测SAA和CRP的荧光免疫吸附检测试剂盒及其制备方法

专利名称：	基于双色量子点联合检测SAA和CRP的荧光免疫吸附检测试剂盒及其制备方法
摘要：	本发明提供了基于双色量子点联合检测SAA和CRP的荧光免疫吸附检测试剂盒及其制备方法，属于体外诊断检测技术领域。荧光免疫吸附检测试剂盒，充分利用量子点多色标记优势和抗体抗原特异性反应的特点，在同一个酶标板孔中包被两种抗体，形成两种“包被抗体‑待测抗原‑量子点标记抗体”的双抗体夹心法，建立了简便、灵敏、稳定的新型多种标志物的检测方法。相比传统的ELISA法，本方法不仅节省检测样本用量，缩短检测时间，而且可提高检测效率，有利于节约检测成本，降低医疗费用。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	河南;41
申请人：	河南大学
发明人：	吴瑞丽;吕雁冰;李林松;申怀彬;李金洁
专利状态：	有效
申请日期：	2019-03-15T00:00:00+0800
发布日期：	2019-04-23T00:00:00+0800
申请号：	CN201910067993.7
公开号：	CN109669044A
代理机构：	北京高沃律师事务所
代理人：	刘奇
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	475000 河南省开封市明伦街85号
主权项：	1.基于双色量子点联合检测SAA和CRP的荧光免疫吸附检测试剂盒，其特征在于，包括：量子点A标记的C-反应蛋白抗体2、量子点B标记的血清淀粉样蛋白A抗体2、包被C-反应蛋白抗体1和血清淀粉样蛋白A抗体1的检测板、C-反应蛋白标准品溶液、血清淀粉样蛋白A标准品溶液、样品稀释液、标记抗体稀释液和洗涤液；所述量子点A和量子点B的发射波长范围为450～800nm，所述量子点A和量子点B的发射波长相差50～300nm；所述量子点A为表面羧基化的水相量子点A；所述量子点B为表面羧基化的水相量子点B。 2.根据权利要求1所述的荧光免疫吸附检测试剂盒，其特征在于，所述量子点A和量子点B包括CdSe/ZnS、ZnCdSeS/ZnS、ZnxCd1-xSe、ZnSe、Cu掺杂的ZnSe、Mn掺杂的ZnSe和InP量子点中的两个。 3.根据权利要求1所述的荧光免疫吸附检测试剂盒，其特征在于，所述量子点A标记的C-反应蛋白抗体2或量子点B标记的血清淀粉样蛋白A抗体2的浓度为1μg/μL～2μg/μL。 4.根据权利要求1所述的荧光免疫吸附检测试剂盒，其特征在于，所述C-反应蛋白抗体1的包被浓度为1～10μg/mL。 5.根据权利要求1所述的荧光免疫吸附检测试剂盒，其特征在于，所述血清淀粉样蛋白A抗体1的包被浓度为1～10μg/mL。 6.根据权利要求1所述的荧光免疫吸附检测试剂盒，其特征在于，所述样品稀释液为含有体积浓度10％新生牛血清的0.01mol/L的磷酸盐缓冲液，所述样品稀释液的pH值为7.4。 7.根据权利要求1所述的荧光免疫吸附检测试剂盒，其特征在于，所述标记抗体稀释液为含有质量浓度0.5％牛血清白蛋白的0.01mol/L的磷酸盐缓冲液，所述标记抗体稀释液的pH值为7.4。 8.根据权利要求1～7任意一项所述的荧光免疫吸附检测试剂盒，其特征在于，所述洗涤液为含有体积浓度0.05％吐温20的0.01mol/L的磷酸盐缓冲液，所述洗涤液的pH值为7.4。 9.权利要求1～8任意一项所述的荧光免疫吸附检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括量子点A标记的C-反应蛋白抗体2或量子点B标记的血清淀粉样蛋白A抗体2的制备方法和包被C-反应蛋白抗体1的检测板或包被血清淀粉样蛋白A抗体1的检测板的制备方法；所述量子点A标记的C-反应蛋白抗体2或量子点B标记的血清淀粉样蛋白A抗体2的制备方法包括以下步骤： 1)将表面包覆羧基的水相量子点活化，得到活化后的量子点A或量子点B； 2)将活化后的量子点A与C-反应蛋白抗体2偶联或将活化后的量子点B与血清淀粉样蛋白A抗体2偶联，得到量子点A标记的C-反应蛋白抗体2或量子点B标记的血清淀粉样蛋白A抗体2；所述包被C-反应蛋白抗体1的检测板或包被血清淀粉样蛋白A抗体1的检测板的制备方法，包括以下步骤： A.用包被液溶解C-反应蛋白抗体1或血清淀粉样蛋白A抗体1，得到标记抗体溶液； B.将所述标记抗体溶液注入检测板的每个孔中，静置过夜，弃去包被液，洗涤，得到包被标记抗体的检测板； C.用封闭液封闭所述包被标记抗体的检测板，孵育，弃去封闭液，干燥。 10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，步骤1)所述活化的方法是将含有表面包覆羧基的水相量子点A或表面包覆羧基的水相量子点B的BS溶液、含S-NHS的BS溶液和含有EDC的MES溶液按照体积比为18:1:1混合，超声处理，固液分离，得到的沉淀为活化后的量子点A或量子点B；所述表面包覆羧基的水相量子点A或表面包覆羧基的水相量子点B的BS溶液为包含0.83mg/mL表面包覆羧基的水相量子点A或表面包覆羧基的水相量子点B的0.005mol/L的BS溶液；所述含S-NHS的BS溶液为含有0.049mg/μL S-NHS的0.005mol/L BS溶液；所述含有EDC的MES溶液为含有0.017mg/μL EDC的0.005mol/LMES溶液。
所属类别：	发明专利