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原文传递用于测量细胞中离子通道活性的组合物和方法

专利名称：	用于测量细胞中离子通道活性的组合物和方法
摘要：	描述用于检测细胞中离子通道的活性的组合物和方法。所述方法包括向所述细胞提供上样缓冲溶液，其中所述上样缓冲液包括铊离子指示剂和任选的氯离子，并向所述细胞提供包括铊离子的刺激缓冲液。提供所述刺激缓冲液可使铊离子通过所述离子通道流入或流出所述细胞。在提供所述刺激缓冲液后，检测响应于铊流入或流出的所述铊离子指示剂的至少一种光学特性的变化，从而检测所述离子通道的所述活性。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	美国;US
申请人：	生命科技股份有限公司
发明人：	D·比查姆;K·吉;A·卢卡维什尼科夫
专利状态：	有效
申请日期：	2017-08-16T00:00:00+0800
发布日期：	2019-04-26T00:00:00+0800
申请号：	CN201780056078.7
公开号：	CN109690317A
代理机构：	上海专利商标事务所有限公司
代理人：	陶家蓉
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	美国加利福尼亚州
主权项：	1.一种用于检测细胞中钾离子通道的活性的方法，其包含： a)使所述细胞与上样缓冲液接触，其中所述细胞包含钾离子通道，其中所述上样缓冲液包含铊离子指示剂； b)向所述细胞施加刺激缓冲液，其中所述刺激缓冲液包含铊离子，从而使铊离子通过所述钾离子通道流入所述细胞；和 c)测量响应于铊流入的所述铊离子指示剂的至少一种光学特性的变化，从而检测所述钾离子通道的所述活性，其中所述铊离子指示剂具有如以下表示的结构：其中R2＝H，并且或其中R1＝H并且其中X＝O或(R6)2C；其中R3、R4、R6和R8独立地是C1-C6烷基；其中R5是H或F；并且其中R7是H、CH3或C2-C6烷基或其盐。 2.根据权利要求1所述的方法，其中所述刺激缓冲液包含小于约4.5mM的铊离子浓度。 3.根据权利要求1所述的方法，其还包含量化铊离子流入的水平。 4.根据权利要求1所述的方法，其中所述铊指示剂的所述至少一种光学特性是强度、极性、频率或光密度。 5.根据权利要求1所述的方法，其中所述至少一种光学特性是发光强度，其中所述方法还包含测量响应于铊离子流入的所述铊离子指示剂的所述发光强度的变化。 6.根据权利要求1所述的方法，其中所述上样缓冲液不含氯化物。 7.根据权利要求1所述的方法，其中所述上样缓冲液还包含生理浓度的氯离子。 8.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞是哺乳动物细胞。 9.根据权利要求1所述的方法，其还包含在使所述细胞与所述上样缓冲液接触后洗涤所述细胞。 10.根据权利要求1所述的方法，其中所述铊离子为盐的形式。 11.根据权利要求10所述的方法，其中所述铊盐能溶于所述上样缓冲液中。 12.根据权利要求10所述的方法，其中所述铊盐是Tl2SO4、Tl2CO3、TlCl、TlOH、TlOAc或TNNO3。 13.根据权利要求1所述的方法，其还包含将细胞外猝灭剂添加到所述上样缓冲溶液中，由此淬灭细胞外铊离子指示剂的发射。 14.根据权利要求13所述的方法，其中所述猝灭剂基本上不是细胞渗透性的。 15.根据权利要求13所述的方法，其中所述猝灭剂是柠檬黄、苋菜红、酸性红37、刚果红、台盼蓝、亮黑或其组合。 16.一种用于检测细胞中钾离子通道的活性的试剂盒，所述试剂盒包含：上样缓冲溶液，其中所述上样缓冲溶液、铊离子指示剂；和刺激缓冲液，其中所述刺激缓冲液包含铊离子，并且其中所述刺激缓冲液使铊离子通过所述离子通道流入所述细胞，其中所述铊离子指示剂具有如以下表示的结构：其中R2＝H，并且或其中R1＝H并且其中X＝O或(R6)2C；其中R3、R4、R6和R8独立地是C1-C6烷基；其中R5是H或F；并且其中R7是H、CH3或C2-C6烷基或其盐。 17.一种化合物，其具有如以下表示的结构：其中R2＝H，并且其中X＝O或(R6)2C；其中R3、R4、R6和R8独立地是C1-C6烷基；其中R5是H或F；并且其中R7是H、CH3或C2-C6烷基或其盐，不同之处在于如果R1是则每个R8不是C1烷基。 18.一种化合物，其具有如以下表示的结构：其中R1＝H并且其中X＝O或(R6)2C；其中R3、R4、R6和R8独立地是C1-C6烷基；其中R5是H或F；并且其中R7是H、CH3或C2-C6烷基或其盐。 19.根据权利要求17或18所述的化合物，其中至少一个R5(如果存在的话)是F。 20.根据权利要求1所述的方法，其中至少一个R5(如果存在的话)是F。 21.根据权利要求16所述的试剂盒，其中至少一个R5(如果存在的话)是F。 22.一种荧光复合物，其包含：根据权利要求17或18所述的化合物；和铊离子，其中所述复合物在适当的光谱波长下激发后发出光。 23.一种组合物，其包含溶解在含水介质中的根据权利要求17或18所述的化合物。 24.根据权利要求22所述的复合物，其溶于含水介质中。
所属类别：	发明专利