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原文传递计数存在于细胞组合物中的颗粒的方法

专利名称：	计数存在于细胞组合物中的颗粒的方法
摘要：	本文提供了评估或测定存在于细胞组合物中的颗粒(例如珠粒)的存在或不存在的方法。还提供了供该方法使用的制品和试剂盒。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	美国;US
申请人：	朱诺治疗学股份有限公司
发明人：	K·邱-东;C·陈;R·勒韦尔;B·克里斯汀;R·贝瑞;J·斯图普斯
专利状态：	有效
申请日期：	2017-08-25T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-07T00:00:00+0800
申请号：	CN201780065800.3
公开号：	CN109863399A
代理机构：	北京坤瑞律师事务所
代理人：	封新琴
分类号：	G01N33/543(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	美国华盛顿州
主权项：	1.一种用于计数细胞组合物中的颗粒或检测细胞组合物中颗粒的存在或不存在的方法，所述方法包括以下步骤： a)进行一次或多次温育，从而产生输出组合物，其中所述一次或多次温育包括在足以诱导以下样品中的一个或多个细胞渗透压裂解的条件下温育包含至少一部分细胞组合物的样品或源自所述细胞组合物的样品；且 b)测定所述输出组合物中颗粒的存在、不存在、数量和/或浓度，从而计数所述细胞组合物中的颗粒或检测所述细胞组合物中颗粒的存在或不存在。 2.权利要求1的方法，其中所述足以诱导渗透压裂解的条件包括使所述样品与低渗溶液接触。 3.权利要求1或权利要求2的方法，其中在诱导渗透压裂解的条件下的温育产生裂解的细胞组合物，且步骤a)中的一次或多次温育进一步包括使所述裂解的细胞组合物或源自所述裂解的细胞组合物的组合物与高渗溶液温育。 4.一种用于计数细胞组合物中的颗粒或检测细胞组合物中颗粒的存在或不存在的方法，所述方法包括下列步骤： a)进行一次或多次温育，从而产生输出组合物，其中步骤a)中的所述一次或多次温育包括： i)在足以诱导裂解以下样品中的一个或多个细胞的条件下使包含至少一部分细胞组合物的样品或源自所述细胞组合物的样品与低渗溶液或高渗溶液温育，从而产生裂解的细胞组合物，和 ii)将至少一部分所述裂解的细胞组合物或来自所述裂解细胞组合物的样品与所述低渗溶液或所述高渗溶液中的另一个温育；和 b)测定所述输出组合物中颗粒的存在、不存在、数量和/或浓度，从而计数所述细胞组合物中的颗粒或检测所述细胞组合物中颗粒的存在或不存在。 5.一种计数细胞组合物中的颗粒或检测细胞组合物中颗粒的存在或不存在的方法，所述方法包括下列步骤： a)进行一次或多次温育，从而产生输出组合物，其中步骤a)中的所述一次或多次温育包括： i)在足以诱导裂解以下样品中的一个或多个细胞的条件下使包含至少一部分细胞组合物的样品或源自所述细胞组合物的样品与低渗溶液温育，从而产生裂解的细胞组合物，和 ii)使至少一部分所述裂解的细胞组合物或源自所述裂解的细胞组合物的样品与高渗溶液温育；和 b)测定所述输出组合物中颗粒的存在、不存在、数量和/或浓度，从而计数所述细胞组合物中的颗粒或检测所述细胞组合物中颗粒的存在或不存在。 6.权利要求1-5中任一项的方法，其中：所述细胞组合物包含或被怀疑包含与所述细胞组合物中的一个或多个细胞的表面结合的一个或多个颗粒；所述细胞组合物包含或被怀疑包含残留的颗粒；所述细胞组合物源自含有与一个或多个所述颗粒结合的细胞的组合物；和/或所述细胞组合物源自从输入组合物中去除颗粒。 7.权利要求1-6中任一项的方法，其中所述细胞组合物通过以下方法产生，所述方法包括： (1)使细胞群与一个或多个所述颗粒混合，从而产生输入组合物；和 (2)从所述输入组合物中的细胞中去除一个或多个所述颗粒，从而产生所述细胞组合物。 8.权利要求7的方法，其中所述一个或多个颗粒能够结合所述群中的一个或多个细胞。 9.权利要求1-8中任一项的方法，其中所述颗粒是珠粒。 10.权利要求1-9中任一项的方法，其中步骤a)中的一次或多次温育从所述输出组合物中减少或去除细胞碎片。 11.权利要求1-10中任一项的方法，其中步骤a)进一步包括冲洗或洗涤所述输出组合物。 12.权利要求11的方法，其中冲洗或洗涤所述输出组合物包括使所述颗粒沉淀并去除一定体积的所述输出组合物或减少所述输出组合物的体积。 13.权利要求12的方法，其包括减少所述输出组合物的体积至在步骤a)的一次或多次温育之前的所述样品的大约相同体积。 14.权利要求12的方法，其包括将所述输出组合物的体积减少了小于100％但大于或者大于约50％、60％、70％、80％、90％或95％。 15.权利要求1-14中任一项的方法，其中一个或多个所述颗粒包含能够与所述细胞组合物中细胞的表面上的大分子结合的生物分子。 16.权利要求15的方法，其中所述生物分子是抗体或其抗原结合片段。 17.权利要求2-16中任一项的方法，其中所述低渗溶液具有小于270mOsm/L的渗透压。 18.权利要求2-17中任一项的方法，其中：所述低渗溶液具有介于或介于约0mOsm/L和270mOsm/L之间、50mOsm/L和200mOsm/L之间、或10mOsm/L和100mOsm/L之间的渗透压；或所述低渗溶液具有小于或小于约250mOsm/L、200mOsm/L、150mOsm/L、100mOsm/L、50mOsm/L、10mOsm/L或更低的渗透压。 19.权利要求2-18中任一项的方法，其中：所述低渗溶液包含介于或介于约0mM和140mM之间的溶质浓度；或所述低渗溶液包含小于或约小于140mM、小于或约小于100mM、小于或约小于50mM、或者小于或约小于10mM的溶质浓度。 20.权利要求2-19中任一项的方法，其中：所述低渗溶液包含介于或介于约0％和0.8％之间或0％和0.5％之间的溶质的重量对体积百分比(％w/v)；或所述低渗溶液包含小于或约小于0.8％、小于或约小于0.6％、小于或约小于0.4％、或者小于或约小于0.2％的溶质的％w/v。 21.权利要求2-20中任一项的方法，其中所述低渗溶液是无溶质的。 22.权利要求2-21中任一项的方法，其中所述低渗溶液是注射用无菌水。 23.权利要求3-22中任一项的方法，其中所述高渗溶液具有大于300mOsm/L的渗透压。 24.权利要求3-23中任一项的方法，其中：所述高渗溶液具有大于或约300mOsm/L、大于或约400mOsm/L、大于或约800mOsm/L、大于或约1200mOsm/L、大于或约1500mOsm/L、大于或约2000mOsm/L、大于或约2500mOsm/L、大于或约3000mOsm/L、或者大于或约4000mOsm/L的渗透压；或所述高渗溶液具有介于或约介于300mOsm/L和5000mOsm/L之间、1000和5000mOsm/L之间、或者1000和3000之间的渗透压。 25.权利要求3-24中任一项的方法，其中：所述高渗溶液具有大于或约200mM、大于或大于约400mM、大于或大于约600mM、大于或大于约800mM、大于或大于约1000mM、大于或大于约2000mM、或者大于或大于约5000mM的溶质溶度；或所述高渗溶液具有介于或介于约200mM和5000mM之间、500mM和2000mM之间、或者1000mM至2000mM之间的溶质浓度。 26.权利要求3-25中任一项的方法，其中：所述高渗溶液包含介于或介于约1.5％和15％之间或2.5％和12％之间的溶质的重量对体积百分比(％w/v)；或所述高渗溶液包含大于或约大于1.5％、大于或约大于3.0％、大于或约大于6.0％、或者大于或约大于8.0％、或者大于或约大于10.0％的溶质的％w/v。 27.权利要求3-26中任一项的方法，其中所述高渗溶液包含溶质，所述溶质为NaCl。 28.权利要求1-27中任一项的方法，其中所述细胞组合物的浓度为至少或至少约2x 105个细胞/mL、至少或至少约5x 105个细胞/mL、至少或至少约1x 106个细胞/mL、至少或至少约5x 106个细胞/mL、或者至少或至少约1x 107个细胞/mL。 29.权利要求1-28中任一项的方法，其中：所述细胞组合物的体积为或约为0.2mL至50mL、0.2mL至20mL、0.5mL至10mL、0.5mL至5mL、或者0.75mL至1.5mL；或所述细胞组合物的体积为至少或至少约0.2mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、5.0mL、10.0mL或20mL、50mL或更多。 30.权利要求1-29中任一项的方法，其中一个或多个所述颗粒具有或包含直径大于0.001μm、大于0.01μm、大于0.1μm、大于1.0μm、大于10μm、大于50μm、大于100μm、或大于1000μm的颗粒。 31.权利要求1-30中任一项的方法，其中一个或多个所述颗粒具有或包含直径为1.0μm至500μm、1.0μm至150μm、1.0μm至30μm、1.0μm至10μm、或1.0μm至5.0μm的颗粒。 32.权利要求1-31中任一项的方法，其中一个或多个所述颗粒具有或包含具有与所述细胞组合物中的细胞的平均直径基本相同或者大于或小于所述细胞组合物中的细胞的平均直径的1.5倍以内的直径的颗粒。 33.权利要求1-32中任一项的方法，其中一个或多个所述颗粒是磁性的和/或一个或多个所述颗粒包含磁芯、顺磁芯或超顺磁芯。 34.权利要求33的方法，其中所述磁芯选自金属氧化物、铁氧体、金属、赤铁矿、金属合金及其组合之中。 35.权利要求1-34中任一项的方法，其中一个或多个所述颗粒包含铁氧化物芯。 36.权利要求33-35中任一项的方法，其中所述磁芯包含包衣。 37.权利要求36的方法，其中所述包衣防护、减少或防止磁芯氧化。 38.权利要求36或权利要求37的方法，其中所述包衣包含聚合物、多糖、二氧化硅、脂肪酸、碳或其组合。 39.权利要求36-37中任一项的方法，其中所述聚合物、所述多糖、所述二氧化硅、所述脂肪酸、所述碳或其组合是可生物降解的。 40.权利要求38或权利要求39的方法，其中所述多糖是壳聚糖、琼脂糖、淀粉、葡聚糖、葡聚糖衍生物或其组合。 41.权利要求38或权利要求39的方法，其中所述聚合物是聚乙二醇、聚(乳酸-共-乙醇酸)、聚戊二醛、聚氨酯、聚苯乙烯和聚乙烯醇或其组合。 42.权利要求1-41中任一项的方法，其中所述细胞具有介于或约介于10μm和30μm之间的直径。 43.权利要求1-42中任一项的方法，其中所述细胞是动物细胞，或所述细胞组合物包含动物细胞。 44.权利要求1-43中任一项的方法，其中所述细胞是人细胞，或所述细胞组合物包含人细胞。 45.权利要求1-44中任一项的方法，其中所述细胞是干细胞，或所述细胞组合物包含干细胞。 46.权利要求45的方法，其中所述干细胞是诱导性多能干细胞(iPSC)。 47.权利要求1-46中任一项的方法，其中所述细胞是免疫细胞，或所述细胞组合物包含免疫细胞。 48.权利要求47的方法，其中所述免疫细胞是T细胞、B细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、自然杀伤(NK)细胞或树突细胞。 49.权利要求1-48中任一项的方法，其中所述细胞组合物已与一个或多个所述颗粒混合，其中所述颗粒包含刺激剂，以在步骤a)中的一次或多次温育之前实现刺激和/或激活所述细胞组合物中的细胞。 50.权利要求49的方法，其中所述细胞是T细胞，且所述刺激剂是抗CD3抗体和/或抗CD28抗体或其抗原结合片段。 51.权利要求50的方法，其中所述细胞是抗原递呈细胞，且所述刺激剂是抗CD8抗体和/或抗CD86抗体或其抗原结合片段。 52.权利要求1-51中任一项的方法，其中所述细胞组合物已与一个或多个所述颗粒混合，其中所述颗粒包含亲和试剂，以在步骤a)中的一次或多次温育之前实现分离或富集所述细胞组合物中的细胞。 53.权利要求52的方法，其中所述亲和试剂包含与所述细胞组合物中一个或多个细胞上的细胞表面蛋白特异性结合的抗体或其抗原结合片段。 54.权利要求53的方法，其中所述细胞表面蛋白选自CD2、CD3、CD4、CD5、CD8、CD25、CD27、CD28、CD29、CD31、CD44、CD45RA、CD45RO、CD54(ICAM-1)、CD127、MHCI、MHCII、CTLA-4、ICOS、PD-1、OX40、CD27L(CD70)、4-1BB(CD137)、4-1BBL、CD30L、LIGHT、IL-2R、IL-12R、IL-1R、IL-15R；IFN-γR、TNF-αR、IL-4R、IL-10R、CD18/CDl la(LFA-1)、CD62L(L-选择素)、CD29/CD49d(VLA-4)、Notch配体(如Delta-样1/4、锯齿状1/2等)、CCR1、CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、CCR7和CXCR3之中。 55.权利要求1-54中任一项的方法，其中：所述一次或多次温育达至少或至少约30秒、1分钟、2分钟、3分钟、4分钟、5分钟、10分钟、20分钟或30分钟；或所述一次或多次温育为或约为30秒至30分钟、1分钟至20分钟、1分钟至10分钟、或1分钟至5分钟。 56.权利要求2-55中任一项的方法，其中：所述低渗溶液和/或高渗溶液的体积为至少或至少约1mL、3mL、9mL、12mL、15mL、18mL、20mL、25mL、30mL、35mL、40mL、45mL、50mL或更多；或所述低渗溶液和/或高渗溶液的体积为或约为1mL至50mL、2mL至30mL、5mL至25mL、或10mL至20mL。 57.权利要求1-56中任一项的方法，其中所述方法不破坏所述颗粒的表面或所述颗粒的表面上的包衣或不去除与所述颗粒表面附接的生物分子。 58.权利要求1-57中任一项的方法，其中步骤b)中的测定包括手动计数、电子粒子计数、基于亲和力的检测、显微镜检查、流式细胞术或磁性细胞分选术。 59.权利要求1-58中任一项的方法，其中步骤b)中的测定包括检测存在于所述颗粒的表面、与所述颗粒的表面相关联或附接的一种或多种材料或生物分子,任选地使用与材料或生物分子特异性结合的结合剂。 60.权利要求59的方法，其中所述颗粒包含包衣，并且所述包衣包含所述材料。 61.权利要求59或权利要求60的方法，其中所述材料是多糖。 62.权利要求61的方法，其中所述材料是葡聚糖，并且/或所述结合剂是抗葡聚糖抗体。 63.权利要求59的方法，其中所述生物分子是附接至所述颗粒表面的针对细胞表面蛋白的抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段任选是抗CD3或抗CD28抗体。 64.一种计数细胞组合物中的颗粒或检测细胞组合物中颗粒的存在或不存在的方法，所述方法包括以下步骤： a)进行一次或多次温育，从而产生输出组合物，其中所述一次或多次温育包括在足以诱导以下样品中一个或多个细胞裂解的条件下温育包含至少一部分细胞组合物的样品或源自所述细胞组合物的样品；和 b)使用与存在于所述颗粒上、与所述颗粒相关联或附接的材料、部分或生物分子特异性结合的结合剂测定所述输出组合物中颗粒的存在、不存在、数量和/或浓度，从而计数所述细胞组合物中的颗粒或检测所述细胞组合物中颗粒的存在或不存在。 65.权利要求64的方法，其中所述结合剂是抗体或其抗原结合片段。 66.权利要求64或权利要求65的方法，其中所述颗粒包含包含所述材料的包衣。 67.权利要求64-66中任一项的方法，其中所述材料是多糖。 68.权利要求64-67中任一项的方法，其中所述材料是葡聚糖，并且/或所述结合剂是抗葡聚糖抗体。 69.权利要求64或权利要求65的方法，其中所述生物分子是附接至所述颗粒表面的针对细胞表面蛋白的抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段任选是抗CD3抗体或抗CD28抗体。 70.权利要求69的方法，其中所述结合剂是针对所述生物分子的抗独特型抗体或抗同种型抗体。 71.权利要求64-70中任一项的方法，其中所述一次或多次温育诱导所述样品中一个或多个细胞的渗透压细胞裂解。 72.权利要求62-71中任一项的方法，其中所述一次或多次温育包含使所述样品与低渗溶液温育。 73.权利要求72的方法，其中所述一次或多次温育进一步包括使所述样品与高渗溶液温育。 74.权利要求64-73中任一项的方法，其中所述测定包括用于检测一个或多个包含所述包衣的颗粒的荧光激活细胞分选术(FACS)。 75.权利要求1-74中任一项的方法，其中步骤a)中的一次或多次温育在约15℃至30℃、18℃至28℃、或20℃至25℃的温度进行。 76.权利要求1-75中任一项的方法，其中步骤a)中的一次或多次温育在约23℃的温度进行。 77.一种制品，其包含：容器，其包含用于实现渗透压细胞裂解的溶液；包装材料；和标签或包装插页，其包含用于计数细胞组合物中的颗粒或检测细胞组合物中颗粒的存在或不存在的说明书。 78.权利要求77的制品，其中所述用于实现渗透压细胞裂解的溶液是低渗溶液。 79.权利要求77或权利要求78的制品，其进一步包含包含高渗溶液的容器。 80.权利要求77-79中任一项的制品，其进一步包含用于检测或鉴定颗粒的仪器或试剂。 81.权利要求80的制品，其中所述仪器或试剂包含血细胞计数器。 82.权利要求80的制品，其中所述仪器或试剂包含对所述颗粒的表面上的材料、部分或生物分子特异的结合剂。 83.权利要求82的制品，其中所述结合剂是抗体或其抗原结合片段。 84.权利要求82或权利要求83的制品，其中所述颗粒包含包含所述材料的包衣。 85.权利要求84的制品，其中所述材料是多糖。 86.权利要求82-85中任一项的制品，其中所述材料是葡聚糖，并且/或所述结合剂是抗葡聚糖抗体。 87.权利要求82或权利要求83的制品，其中所述生物分子是附接至所述颗粒表面的抗细胞表面蛋白的抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段任选是抗CD3抗体或抗CD28抗体。 88.权利要求87的制品，其中所述结合剂是抗所述生物分子的抗独特型抗体或抗同种型抗体。 89.权利要求82-88中任一项的制品，其中所述结合剂是荧光标记的。
所属类别：	发明专利