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原文传递检测细胞的组合物及检测方法

专利名称：	检测细胞的组合物及检测方法
摘要：	一种检测细胞的组合物，包括5’端具有巯基的多聚核苷酸，附着于多聚核苷酸的金属银，而形成多聚核苷酸‑Ag纳米簇；与多聚核苷酸结合的第一抗体，用于与目标细胞结合，将多聚核苷酸‑Ag纳米簇固定于目标细胞上；偶联于磁性颗粒的第二抗体，用于与目标细胞结合；寡聚核苷酸，其于溶液中时，附着于金属纳米颗粒表面。本发明的检测组合物，采用单链的多聚核苷酸和单链的寡聚核苷酸相组合，利用不同金属的光电特性，建立光谱吸收峰与目标细胞之间的关联性，实现对样本中目标细胞进行定性和定量检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	上海;31
申请人：	章毅
发明人：	章毅;赵婧;伍婷;曹亚;朱小立
专利状态：	有效
申请日期：	2019-02-19T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-07T00:00:00+0800
申请号：	CN201910125822.5
公开号：	CN109856076A
代理机构：	上海市海华永泰律师事务所
代理人：	包文超
分类号：	G01N21/33(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	200051 上海市长宁区虹桥路1191号9楼
主权项：	1.一种组合物，其特征在于包括：多聚核苷酸，其5’端具有巯基；金属银，其附着于所述的多聚核苷酸，形成多聚核苷酸-Ag纳米簇；第一抗体，其与所述的多聚核苷酸结合，用于与目标细胞结合，将所述的多聚核苷酸-Ag纳米簇固定于所述的目标细胞上；第二抗体，其偶联于磁性颗粒，用于与所述的目标细胞结合；金属金纳米颗粒；寡聚核苷酸，其于溶液中时，附着于金属纳米颗粒表面。 2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于还包括HNO3，其作用于所述的多聚核苷酸-Ag纳米簇，溶出Ag离子。 3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于所述的多聚核苷酸其序列包括5′-TATATAATTCCCACCCAC-3′。 4.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于所述的寡聚核苷酸为单链寡聚胞嘧啶。 5.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于所述的寡聚核苷酸序列包括5′-CCCCCCCCCCCC-3′。 6.根据权利要求1所述的组合物在检测间充质干细胞中的应用。 7.根据权利要求1所述的组合物在定性或定量检测间充质干细胞中的应用，其特征在于所述的第一抗体为CD44抗体，所述的第二抗体为CD90抗体。 8.一种检测细胞的方法，其特征在于包括：将偶联第一抗体的多聚核苷酸-Ag纳米簇加入含有目标细胞的待测样本，于37℃±0.5℃反应1～2小时，使得多聚核苷酸-Ag纳米簇连接于目标细胞表面；还加入偶联第二抗体的磁性颗粒，于25℃±0.5℃反应2～3小时，使得偶联第二抗体的磁性颗粒连接于目标细胞表面；然后加入稀HNO3以溶出银离子，于25℃±0.5℃反应2～3小时后，再加入金属金纳米颗粒与寡聚核苷酸混匀后，于波长400nm～800nm的可见-紫外光谱下检测，并在620nm处显示吸收峰，实现目标细胞进行定性检测。 9.一种检测细胞的方法，其特征在于包括：将偶联第一抗体的多聚核苷酸-Ag纳米簇加入含有目标细胞的待测样本，于37℃±0.5℃反应1～2小时，使得多聚核苷酸-Ag纳米簇连接于目标细胞表面；还加入偶联第二抗体的磁性颗粒，于25℃±0.5℃反应2～3小时，使得偶联第二抗体的磁性颗粒连接于目标细胞表面；然后加入稀HNO3以溶出银离子，于25℃±0.5℃反应2～3小时后，再加入金属金纳米颗粒与寡聚核苷酸混匀后，于波长400nm～800nm的可见-紫外光谱下检测，采用在620nm和520nm处的紫外吸收值之比建立与目标细胞浓度的对应曲线，实现目标细胞进行定量检测。 10.根据权利要求8或9所述的检测细胞的方法，其特征在于所述的目标细胞为间充质干细胞时，细胞浓度的对数值与检测体系在620nm和520nm处的紫外吸收值之比之间呈良好的线性关系，线性方程为A620/A520＝0.1347+0.1181gCMSC，R2＝0.993，检测限为2个细胞/mL。 11.根据权利要求8或9所述的检测细胞的方法，其特征在于所述的多聚核苷酸其序列包括5′-TATATAATTCCCACCCAC-3′。 12.根据权利要求8或9所述的检测细胞的方法，其特征在于所述的寡聚核苷酸为单链寡聚胞嘧啶。 13.根据权利要求8或9所述的检测细胞的方法，其特征在于所述的寡聚核苷酸序列包括5′-CCCCCCCCCCCC-3′。
所属类别：	发明专利