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原文传递电化学检测细胞的方法及其组合物

专利名称：	电化学检测细胞的方法及其组合物
摘要：	一种检测细胞的组合物，以SEQ ID No 2～5所示四条寡DNA自组装形成的DNA组装体为模板合成银纳米簇，细胞表面经TCEP处理后，经迈克尔加成反应将5’端具有马来酰亚胺基团的寡DNA链连接到细胞表面，并通过碱基互补配对原则与含有银纳米簇的DNA组装体相结合。在电极上修饰的抗体用于捕获目标细胞，银纳米簇固定于目标细胞上，并通过在硝酸溶液中溶出金属银离子实现目标间充质干细胞的定量检测。本发明的检测组合物，采用DNA组装体模板化银纳米簇作为电化学信号，点击化学介导的信号放大体系，实现对样本中目标细胞进行定性和定量检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	上海;31
申请人：	章毅
发明人：	章毅;赵婧;伍婷;曹亚
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-04T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-22T00:00:00+0800
申请号：	CN201910607519.9
公开号：	CN110361433A
代理机构：	上海市海华永泰律师事务所
代理人：	包文超
分类号：	G01N27/327(2006.01);G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	200051 上海市长宁区虹桥路1191号9楼
主权项：	1.一种组合物，其特征在于包括：寡核苷酸，其5’端具有马来酰亚胺基团；金属银，其附着于DNA组装体，形成DNA组装体-银纳米簇；抗体，其通过杯[4]芳烃偶联于金电极，用于与所述的目标细胞结合。 2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于还包括硝酸，其作用于所述的DNA组装体-银纳米簇，溶出银离子。 3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于所述的寡核苷酸其序列如SEQ ID No1所示。 4.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于所述的DNA组装体由SEQ ID No2～5所示序列自组装形成。 5.根据权利要求1所述的组合物在电化学检测细胞中的应用。 6.根据权利要求1所述的组合物在电化学检测间充质干细胞中的应用。 7.根据权利要求1所述的组合物在电化学定性或定量检测间充质干细胞中的应用，其特征在于抗体为CD44抗体。 8.一种检测细胞的方法，其特征在于包括：抗体功能化的金电极与三(2-羧乙基)膦处理后的目标细胞悬液于37℃±0.5℃反应1～2小时使目标细胞连接到金电极上；加入马来酰亚胺基团修饰的寡核苷酸溶液，于37℃±0.5℃反应0.5～1小时，使得马来酰亚胺基团修饰的寡核苷酸连接到细胞表面；加入DNA组装体模板化的银纳米簇，于37℃±0.5℃反应0.5～1小时，使得银纳米簇与寡核苷酸连接，从而将银纳米簇固定在细胞表面；然后加入稀硝酸以溶出银离子，于25℃±0.5℃反应2～3小时后，在-0.1V-0.5V的电势下，并在0.216V处显示金属银的电化学信号峰，实现目标细胞进行定性检测。 9.一种检测细胞的方法，其特征在于包括：抗体功能化的金电极与三(2-羧乙基)膦处理后的目标细胞悬液于37℃±0.5℃反应1～2小时使目标细胞连接到金电极上；加入马来酰亚胺基团修饰的寡核苷酸溶液，于37℃±0.5℃反应0.5～1小时，使得马来酰亚胺基团修饰的寡核苷酸连接到细胞表面；加入DNA组装体模板化的银纳米簇，于37℃±0.5℃反应0.5～1小时，使得银纳米簇与寡核苷酸连接，从而将银纳米簇固定在细胞表面；然后加入稀硝酸以溶出银离子，于25℃±0.5℃反应2～3小时后，在-0.1V-0.5V的电势下，并在0.216V处显示金属银的电化学信号峰，实现目标细胞进行定量检测。 10.根据权利要求8或9所述的检测细胞的方法，其特征在于所述的目标细胞为间充质干细胞时，细胞浓度的对数值与检测体系0.216V处的电化学信号值之间呈良好的线性关系，线性方程为Y＝1.07034lgC间充质干细胞-1.22915，R2＝0.989，检测限为30个细胞。 11.根据权利要求8或9所述的检测细胞的方法，其特征在于所述的寡核苷酸其序列如SEQ ID No 1所示。 12.根据权利要求8或9所述的检测细胞的方法，其特征在于所述的DNA组装体由SEQ IDNo 2～5所示的序列组成。
所属类别：	发明专利