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原文传递一种适用于氨基残留物的高灵敏ELISA检测方法

专利名称：	一种适用于氨基残留物的高灵敏ELISA检测方法
摘要：	本发明公开了一种适用于氨基残留物的高灵敏ELISA检测方法，包括以下步骤：（1）乙醛酸上的羧基与生物素进行连接，制得生物素修饰的乙醛酸作为氨基残留物检测的通用中间体；（2）将步骤（1）制得的氨基残留物检测的通用中间体加入样本中，与样本中的氨基残留物发生反应，通过萃取得到带有生物素修饰的乙醛酸的氨基残留物衍生物；（3）使用链霉亲和素包板，氨基残留物衍生物作为待检测物，氨基残留物抗体、二抗分别孵育后显色得到吸光值。本发明以生物素作为间接检测对应，实现对目标物的间接检测。通过生物素与亲和素的信号放大作用，可以增加滞留在酶标板上的氨基残留物的含量，进而提高检测的灵敏度。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	江苏美正生物科技有限公司
发明人：	张勋
专利状态：	有效
申请日期：	2018-12-20T00:00:00+0800
发布日期：	2019-04-30T00:00:00+0800
申请号：	CN201811562772.9
公开号：	CN109696553A
代理机构：	南京经纬专利商标代理有限公司
代理人：	楼高潮
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	214135 江苏省无锡市新区菱湖大道97-1号兴业楼C301号
主权项：	1.一种适用于氨基残留物的高灵敏ELISA检测方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）乙醛酸上的羧基与生物素进行连接，制得生物素修饰的乙醛酸，作为氨基残留物检测的通用中间体；（2）将步骤（1）制得的氨基残留物检测的通用中间体加入样本中，与样本中的氨基残留物发生反应，通过萃取得到带有生物素修饰的乙醛酸的氨基残留物衍生物；（3）使用链霉亲和素包被96孔板，再用封闭液封闭；然后加入步骤（2）提取的衍生物于37℃条件下孵育，孵育完成后洗板烘干；再加入氨基残留物的抗体于37℃条件下孵育，孵育完成后洗板烘干，最后加入识别氨基残留物的抗体的酶标二抗孵育，孵育后加入显色液显色。 2.根据权利要求1所述的一种适用于氨基残留物的高灵敏ELISA检测方法，其特征在于，所述生物素为氨基聚乙二醇生物素，生物素通过氨基与乙醛酸的羧基相连接。 3.根据权利要求1所述的一种适用于氨基残留物的高灵敏ELISA检测方法，其特征在于，所述氨基残留物包括金刚烷胺、磺胺类、克仑特罗、或抗生类，所述磺胺类包括磺胺甲基嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺喹恶啉，所述抗生类包括庆大霉素、卡那霉素、安普霉素、链霉素或新霉素。 4.根据权利要求1所述的一种适用于氨基残留物的高灵敏ELISA检测方法，其特征在于，所述步骤（3）的具体操作方法为： a．将1mg/mL的链霉亲和素作为包被原液，用0.05M、pH9.6的碳酸盐缓冲液将包被原液以1:5000-1:10000的稀释比进行稀释，作为包被液，在酶标板的每孔中加入100μL，4℃孵育过夜，然后用含0.1％明胶的上述碳酸盐缓冲液作为封闭液，200μL/孔，于37℃烘箱封闭2h；用洗液洗板3-5次，并将酶标板拍干； b．每孔分别加入100μL以标准品稀释液PBST稀释的氨基残留物衍生物，于37℃烘箱中孵育30min，所述标准品稀释液PBST为含0.05％吐温-20、pH 7.4、0.01M的磷酸盐缓冲溶液；用洗液洗板3-5次，并将酶标板拍干； c. 将1mg/mL的氨基残留物的抗体以1:5000-1:8000比例稀释，100μL/孔加入酶标板中，于37℃条件下孵育1h；用洗液洗板3-5次，并将酶标板拍干； d. 将稀释后的2μg/mL的酶标二抗以100μL/孔加入酶标板中，于37℃条件下孵育30min；用洗液洗板3-5次，并将酶标板拍干； e. 将显色液以100μL/孔加入酶标板中，于37℃条件下孵育显色10-15min；然后以50μL/孔加入终止液，将酶标板放到酶标仪上读取450nm的吸光值。
所属类别：	发明专利