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原文传递一种适用于氨基残留物检测的高灵敏免疫层析方法

专利名称：	一种适用于氨基残留物检测的高灵敏免疫层析方法
摘要：	本发明提供了一种适用于氨基残留物检测的高灵敏免疫层析方法，检测方法包括以下步骤：（1）乙醛酸上的羧基与生物素进行连接，制得生物素修饰的乙醛酸，作为氨基残留物检测的通用中间体；（2）制备氨基残留物抗体修饰的磁性粒子和质控抗体修饰的磁性粒子；（3）生物素修饰的乙醛酸与氨基残留物反应，并与氨基残留物抗体修饰的磁性粒子孵育后，通过磁分离洗涤制得待检测物；将质控抗体修饰的磁性粒子与上述待检测物进行混合，制得混合检测物；（4）试纸条组装与免疫层析检测。该方法实现了组织样本中氨基残留物的分离，简化了目标物的分离纯化步骤，并且通过信号放大效应，提高了目标物检测的灵敏度。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	江苏美正生物科技有限公司
发明人：	张勋
专利状态：	有效
申请日期：	2019-01-31T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-14T00:00:00+0800
申请号：	CN201910097930.6
公开号：	CN109884039A
代理机构：	南京经纬专利商标代理有限公司
代理人：	楼高潮
分类号：	G01N21/78(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	214135 江苏省无锡市新区菱湖大道97-1号兴业楼C301号
主权项：	1.一种适用于氨基残留物检测的高灵敏免疫层析方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）乙醛酸上的羧基与生物素进行连接，制得生物素修饰的乙醛酸，作为氨基残留物检测的通用中间体；（2）制备氨基残留物抗体修饰的磁性粒子和质控抗体修饰的磁性粒子；（3）生物素修饰的乙醛酸与氨基残留物反应，并与步骤（2）制得的氨基残留物抗体修饰的磁性粒子在室温下孵育，通过磁分离去除上清并使用磷酸盐缓冲液分离洗涤，最后一次洗涤完成后将磁性粒子再次用磷酸盐缓冲液重悬，再次重悬后的溶液即为待检测物；将质控抗体修饰的磁性粒子再与上述待检测物进行混合，制得混合待检测物；（4）以底板、样品垫、层析膜、吸水垫和外壳构建成免疫层析试纸条，层析膜上设有检测线和质控线，检测线上固定有链霉亲和素，质控线上固定有识别质控抗体的二抗，所述层析膜、底板和外壳均没有荧光特性；（5）将混合待检测物滴加于试纸条的样品垫处，进行免疫层析，当混合检测液流经检测线和质控线后，检测线和质控线的位置将会出现指示信号，根据检测线的信号强度，实现目标物的定量检测。 2.根据权利要求1所述的一种适用于氨基残留物检测的高灵敏免疫层析方法，其特征在于，所述生物素为氨基聚乙二醇生物素，生物素通过氨基与乙醛酸的羧基相连接。 3.根据权利要求1所述的一种适用于氨基残留物检测的高灵敏免疫层析方法，其特征在于，所述氨基残留物包括金刚烷胺、磺胺类、克仑特罗、或抗生类，所述磺胺类包括磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲恶唑或磺胺喹恶啉，所述抗生类包括庆大霉素、卡那霉素、安普霉素、链霉素或新霉素。 4.根据权利要求1所述的一种适用于氨基残留物检测的高灵敏免疫层析方法，其特征在于，所述磁性粒子为羧基、氨基或者羟基修饰的磁纳米粒子或金包磁纳米粒子。 5.根据权利要求1所述的一种适用于氨基残留物检测的高灵敏免疫层析方法，其特征在于，所述质控抗体为与残留物抗体不产生交叉反应的抗体。 6. 根据权利要求1所述的一种适用于氨基残留物检测的高灵敏免疫层析方法，其特征在于，所述磁性粒子的粒径为100-300 nm。
所属类别：	发明专利