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原文传递一种研究口用型无烟气烟草制品烟草特有的亚硝胺口腔释放情况的方法

专利名称：	一种研究口用型无烟气烟草制品烟草特有的亚硝胺口腔释放情况的方法
摘要：	本发明涉及一种口用型无烟气烟草制品烟草特有的亚硝胺口腔释放情况的研究方法，该方法包括口用型无烟气烟草制品的筛选、模拟溶出参数的确定、体内实验烟草特有的亚硝胺口腔释放情况的测定、体外试验模拟等步骤。本发明利用体内实验进行体外研究参数确定，体外采用全仿真模拟咀嚼机对样品进行测试，所用装置能完全模拟人体口腔吸食无烟气烟草制品的状态，在咀嚼力度、咀嚼频率、唾液流量、口腔温度上均可调控，且可控性强稳定性高，操作简单。本发明研究方法可以很好的避免传统人工品尝带来的主观和客观因素的影响，避免了大量人群实验的伦理道德制约，同时节约实验费用的同时还减少了因人体实验对健康带来的危害，适用于样品的批量研究。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	云南;53
申请人：	云南中烟工业有限责任公司
发明人：	杨继;杨柳;赵杨;段沅杏;米其利;高茜;管莹;赵辉;刘春波;申钦鹏
专利状态：	有效
申请日期：	2018-11-13T00:00:00+0800
发布日期：	2019-04-30T00:00:00+0800
申请号：	CN201811348045.2
公开号：	CN109696491A
代理机构：	昆明正原专利商标代理有限公司
代理人：	金耀生;于洪
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	650231 云南省昆明市红锦路367号
主权项：	1.一种研究口用型无烟气烟草制品烟草特有的亚硝胺口腔释放情况的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤（1），口用型无烟气烟草制品的筛选：对待研究的某种口用型无烟气烟草制品选取多颗进行重量检测，计算该制品单颗重量平均值和方差；之后，选择重量范围在平均值±（1-3）倍方差范围内的制品作为试样进行后续测定；步骤（2），模拟溶出参数的确定：选择多位身体健康的自愿者在自然状态下吸食步骤（1）筛选出的试样，并在事先确定的时间点收集残留样品和各自愿者唾液，每个时间点使用一颗样品；步骤（3），体内实验烟草特有的亚硝胺口腔释放情况的测定：利用液相色谱质谱分别对待研究口用型无烟气烟草制品、残留样品和自愿者唾液进行测试，以确定各时间段自愿者吸食样品的烟草特有的亚硝胺溶出量；步骤（4），体外试验模拟：采用全仿真模拟咀嚼机模拟吸食该待研究口用型无烟气烟草制品，并根据步骤（3）得到的自愿者吸食样品的烟草特有的亚硝胺溶出量和步骤（2）得到的唾液量，设置全仿真模拟咀嚼机的压合力、唾液流速、唾液量和口腔温度参数；步骤（5），液相色谱质谱分析：利用液相色谱质谱分别对待研究口用型无烟气烟草制品、残留样品和全仿真模拟咀嚼机中的人工唾液进行测试，用此测试结果来表征待研究口用型无烟气烟草制品的烟草特有的亚硝胺口腔释放情况；步骤（6），烟草特有的亚硝胺口腔释放规律研究：采用上述全仿真模拟咀嚼机及设定的参数对同种口用型无烟气烟草制品整个咀嚼过程中的不同时间点进行测试，绘制烟草特有的亚硝胺释放曲线，进行烟草特有的亚硝胺口腔释放规律研究。 2.根据权利要求1所述的研究口用型无烟气烟草制品烟草特有的亚硝胺口腔释放情况的方法，其特征在于，步骤（1）中，选择至少50颗待研究的某种口用型无烟气烟草制品进行重量检测。 3.根据权利要求1所述的研究口用型无烟气烟草制品烟草特有的亚硝胺口腔释放情况的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述的口用型无烟气烟草制品的种类包括口含烟、嚼烟、含化烟、膏状含烟、牙粉和可溶解烟草，其中，所述的口含烟的种类包括袋装口含烟、烟草口香糖、含片和硬质糖。 4.根据权利要求1所述的研究口用型无烟气烟草制品烟草特有的亚硝胺口腔释放情况的方法，其特征在于，步骤（2）中，所述自愿者为年龄为18-55周岁；所述残留样品和自愿者唾液的收集时间点为实验开始后0-60min内任意一点。 5.根据权利要求1所述的研究口用型无烟气烟草制品烟草特有的亚硝胺口腔释放情况的方法，其特征在于，步骤（4）体外试验模拟时，所采用的人工唾液为无机盐类人工唾液或蛋白酶类人工唾液。 6.根据权利要求1所述的研究口用型无烟气烟草制品烟草特有的亚硝胺口腔释放情况的方法，其特征在于，步骤（5）利用液相色谱质谱进行测试时，采用内标法定量。 7.根据权利要求1或6所述的研究口用型无烟气烟草制品烟草特有的亚硝胺口腔释放情况的方法，其特征在于，对口用型无烟气烟草制品、残留样品采用液相色谱质谱进行测试时，做如下处理：测试时取1颗制品或残留样品，加入0.01~0.1 mol/L盐酸水溶液1~5 mL和100ng/mL的混合内标溶液100μL，涡旋混匀，超声提取，离心，上清液全部上样到活化后的Oasis HLB固相萃取柱上，加3mL体积浓度为2%甲醇水溶液淋洗，最后用3mL甲醇洗脱，收集洗脱液氮气吹干，加入1.0~5.0 mL甲醇超声溶解，经0.2μm滤膜过滤至进样瓶中，之后使用液相色谱质谱定量分析；所述的混合内标溶液中的内标物为烟草特有的亚硝胺的氘代物，各个内标物的浓度均为100ng/mL。 8.根据权利要求7所述的研究口用型无烟气烟草制品烟草特有的亚硝胺口腔释放情况的方法，其特征在于，超声提取时间为30~120 min；离心时间为5~30 min，转速为≧10000r/min；Oasis HLB固相萃取柱的活化方式为：依次经1~5mL甲醇、2~10mL超纯水淋洗进行活化。 9.根据权利要求1或8所述的研究口用型无烟气烟草制品烟草特有的亚硝胺口腔释放情况的方法，其特征在于，液相色谱为高效液相色谱，参数如下：色谱柱：Waters Acquity BEH C18柱（1.7 μm，2.1 mm×100 mm）；流速：0.3 mL/min；柱温：40 ℃；进样量：5 μL；流动相A：甲醇，流动相B：质量浓度为0.1%的乙酸水溶液；测试时，采用梯度洗脱，梯度洗脱条件见表1；表1 。 10.根据权利要求1或8所述的研究口用型无烟气烟草制品烟草特有的亚硝胺口腔释放情况的方法，其特征在于，质谱条件如下：离子源：电喷雾电离源；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测；电喷雾电压：5000 V；烟草特有的亚硝胺质谱检测参数见表2；表2 。
所属类别：	发明专利