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原文传递水生动物组织中百菌清残留的检测分析方法

专利名称：	水生动物组织中百菌清残留的检测分析方法
摘要：	本发明公开了一种水生动物组织中百菌清残留的检测分析方法，属于检测技术领域，该检测分析方法包括以下步骤：1)水生动物组织中百菌清的提取；2)水生动物组织中百菌清检测。该方法在完成水生动物组织中百菌清提取的基础上，对样品前处理、色谱条件和检测方法等进行优化，使得该检测分析方法处理效率高，快速检测、高灵敏性，特别是能在水生动物组织中精准定量百菌清，为全面普查水生动物组织中百菌清的含量水平及分布特征提供可靠的分析手段。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖南;43
申请人：	中南大学
发明人：	姚晶晶;李海普;林惠菊;杨兆光;李跃;屠焓钰
专利状态：	有效
申请日期：	2019-01-28T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-03T00:00:00+0800
申请号：	CN201910082702.1
公开号：	CN109709232A
代理机构：	济南帮友知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	张小鸽
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	410012 湖南省长沙市岳麓区麓山南路932号
主权项：	1.水生动物组织中百菌清残留的检测分析方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)水生动物组织中百菌清的提取 ①取水生动物组织样品和蛋白酶置于离心管一中，超声，涡旋，静置； ②萃取：在步骤①静置完毕的离心管一中加入萃取溶剂，涡旋，加入CH3COONa和无水MgSO4，涡旋，振荡，离心，取出萃取液并冷冻； ③取离心管二加入N-丙基乙二胺、C18、无水MgSO4，然后加入步骤②中经冷冻的萃取液，涡旋，离心，然后取上清液，氮吹近干后，加入稳定剂，用正己烷定容，过有机滤膜，得到待测样品； (2)检测 ①绘制标准曲线； ②将步骤(1)③得到的待测样品置于进样瓶中，用GC-ECD检测。 2.根据权利要求1所述的水生动物组织中百菌清残留的检测分析方法，其特征在于，所述水生动物组织为鱼肉，虾肉，蟹肉中的任意一种；优选地，所述水生动物组织为鱼肉。 3.根据权利要求1所述的水生动物组织中百菌清残留的检测分析方法，其特征在于，步骤(1)①中的pH为7-8，温度为40-50℃，超声功率为200-400W；进一步地，超声时间为2min-2h；进一步地，超声时间为10min-40min；进一步地，超声时间为30min；进一步地，步骤(1)①中的pH为7.5，温度为45℃，超声功率为300W。 4.根据权利要求1所述的水生动物组织中百菌清残留的检测分析方法，其特征在于，步骤(1)②、(1)③中离心管为聚丙烯离心管；进一步地，步骤(1)②中冷冻时间为1-8h；进一步地，步骤(1)②中冷冻时间为3-6h；进一步地，步骤(1)②中冷冻时间为4h；进一步地，步骤(1)②中所述萃取溶剂为100％甲醇或者酸性乙腈溶液；进一步地，所述酸性乙腈溶液为甲酸/乙腈混合溶液或者乙酸/乙腈混合溶液；进一步地，所述甲酸/乙腈混合溶液为甲酸体积分数为0.5-2％的乙腈溶液；所述乙酸/乙腈混合溶液为乙酸体积分数为0.5-2％的乙腈溶液；进一步地，所述甲酸/乙腈混合溶液为甲酸体积分数为1％的乙腈溶液；所述乙酸/乙腈混合溶液为乙酸体积分数为1％的乙腈溶液；进一步地，所述酸性乙腈溶液为乙酸/乙腈混合溶液。 5.根据权利要求1所述的水生动物组织中百菌清残留的检测分析方法，其特征在于，步骤(1)②中萃取条件为：萃取温度70℃，预热时间5min，稳定萃取时间5min；进一步地，萃取步骤循环1-5次；进一步地，此萃取步骤循环3次。 6.根据权利要求1所述的水生动物组织中百菌清残留的检测分析方法，其特征在于，步骤(1)②中的CH3COONa和无水MgSO4的质量比为1：(0.2-10)；进一步地，步骤(1)②中的CH3COONa和无水MgSO4的质量比为1：4；进一步地，无水MgSO4需进行预处理，所述预处理步骤为：在380-520℃下灼烧2-8h，冷却后装入磨口玻璃瓶中，置于干燥器中保存。 7.根据权利要求1所述的水生动物组织中百菌清残留的检测分析方法，其特征在于，步骤(1)③中所述稳定剂为甲酸。 8.根据权利要求1所述的水生动物组织中百菌清残留的检测分析方法，其特征在于，步骤(2)①绘制标准曲线的方法为：配制百菌清浓度为20ppb、50ppb、100ppb、200ppb、400ppb、500ppb的标准溶液，用GC-ECD检测，绘制标准曲线；进一步地，所述步骤(2)②中，GC-ECD检测时，检测仪器为Agilent 7890A型气相色谱仪，检测器为μ-ECD，色谱柱类型为HP-5石英毛细管柱(30m×0.32mm×0.25μm)，氮气流量为1mL/min，进样量为1μL，进样口温度为250℃。 9.根据权利要求1所述的水生动物组织中百菌清残留的检测分析方法，其特征在于，所述水生动物组织中百菌清经超声蛋白质酶解后，其加标回收率为70～110％，RSD小于10％，检出限为0.012μg/L。 10.根据权利要求1-9任一所述的水生动物组织中百菌清残留的检测分析方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)水生动物组织中百菌清的提取 ①5.0g鱼肉样品和10mL蛋白酶，置于聚丙烯离心管一中，调节pH为7.5，300W超声，涡旋，静置； ②萃取：在步骤①静置完毕的聚丙烯离心管一中加入10mL醋酸体积分数为1％的乙腈溶液，涡旋，加入CH3COONa和无水MgSO4，涡旋，振荡，离心，取出萃取液并冷冻4h；此步骤②中，萃取温度70℃，预热时间5min，稳定萃取时间5min；此萃取步骤循环3次，合并三次萃取液； ③取4mL离心管二加入50mg N-丙基乙二胺，100mg C18，300mg无水MgSO4，然后加入步骤②中经冷冻的萃取液，涡旋，离心，然后取上清液，氮吹近干后，加入稳定剂，用正己烷定容，过有机滤膜，得到待测样品；此步骤③中的无水MgSO4使用前先经以下预处理：在450℃下灼烧4h，冷却后装入磨口玻璃瓶中，置于干燥器中保存。 (2)检测 ①绘制标准曲线：配制百菌清浓度为20ppb、50ppb、100ppb、200ppb、400ppb、500ppb的标准溶液，用GC-ECD检测，绘制标准曲线； ②将步骤(1)得到的待测样品置于进样瓶中，用GC-ECD检测，检测仪器为Agilent7890A型气相色谱仪，检测器为μ-ECD，色谱柱类型为HP-5石英毛细管柱(30m×0.32mm×0.25μm)，氮气流量为1mL/min，进样量为1μL，进样口温度为250℃。
所属类别：	发明专利