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原文传递一种酶联核酸适配体微孔板光学分析小分子的方法

专利名称：	一种酶联核酸适配体微孔板光学分析小分子的方法
摘要：	本发明公开了一种酶联核酸适配体微孔板光学分析小分子的方法。本发明提供了一种检测待测样品中目标小分子的光学分析方法，包括如下步骤：将待测样品与固定于微孔板上的短链互补核酸竞争性地与酶标记的核酸适配体结合，再加入所述酶催化底物进行催化反应，产生检测信号，根据信号变化实现对目标小分子的检测；所述短链互补核酸与所述核酸适配体互补。本方法利用了核酸适配体可以和互补核酸链杂交的特性，目标小分子存在时，核酸适配体与目标小分子，不再与互补核酸链杂交。方法采用微孔板作为固相基底,利用酶标仪进行信号检测，便于快速检测多个样品，具有高通量，易实现自动化。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	中国科学院生态环境研究中心
发明人：	赵强;李亚飘;孙琳琳
专利状态：	有效
申请日期：	2019-01-08T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-03T00:00:00+0800
申请号：	CN201910014630.7
公开号：	CN109709321A
代理机构：	北京纪凯知识产权代理有限公司
代理人：	关畅;白艳
分类号：	G01N33/543(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	100085 北京市海淀区双清路18号
主权项：	1.一种利用酶标记的识别目标小分子的核酸适配体和短链互补核酸修饰微孔板检测目标小分子的光学分析方法，包括如下步骤： a)将酶标记的识别目标小分子的核酸适配体和待测样品加入短链互补核酸修饰微孔板中反应，然后洗涤微孔板；所述短链互补核酸的序列与所述酶标记的识别目标小分子的核酸适配体的核酸序列全部或部分互补； b)向a)处理后的微孔板中加入所述酶的底物进行酶反应，产生检测信号，根据所述信号强度的变化实现检测目标小分子。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在所述将酶标记的识别目标小分子的核酸适配体和待测样品加入短链互补核酸修饰微孔板中反应前，还包括如下步骤：将所述酶标记的识别目标小分子的核酸适配体和待测样品混合温育。 3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述短链互补核酸修饰微孔板按照如下方法制备：将生物素标记的短链互补核酸通过包被在微孔板上的链霉亲和素固定在所述微孔板，得到短链互补核酸修饰微孔板。 4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：所述酶为辣根过氧化物酶。 5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述酶标记的识别目标小分子的核酸适配体为将链霉亲和素标记的辣根过氧化物酶与生物素标记的识别目标小分子的核酸适配体亲和连接得到。 6.根据权利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：所述光学分析方法为吸光度法或化学发光法。 7.根据权利要求1-6中任一所述的方法，其特征在于：所述目标小分子为黄曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A或三磷酸腺苷。 8.根据权利要求1-7中任一所述的方法，其特征在于：所述目标小分子为黄曲霉毒素B1，所述辣根过氧化物酶标记的识别黄曲霉毒素B1的核酸适配体的核苷酸序列为序列1或该序列衍生物，其对应的短链互补核酸的核苷酸序列为序列2或该序列衍生物；或，所述目标小分子为赭曲霉毒素A，所述辣根过氧化物酶标记的识别赭曲霉毒素A的核酸适配体的核苷酸序列为序列3或该序列衍生物，其对应的短链互补核酸的核苷酸序列为序列4或该序列衍生物；或，所述目标小分子为三磷酸腺苷，所述辣根过氧化物酶标记的识别三磷酸腺苷的核酸适配体的核苷酸序列为序列5或该序列衍生物，其对应的短链互补核酸的核苷酸序列为序列6或该序列衍生物；所述序列衍生物为对应序列删除或增加一个或几个核苷酸，得到与所述序列具有相同功能的序列的衍生物。 9.一种检测待测样品中目标小分子的试剂盒，包括权利要求1-8任一中所述酶标记的识别目标小分子的核酸适配体和所述短链互补核酸修饰微孔板。 10.权利要求9所述试剂盒在检测待测样品中目标小分子或其含量中的应用；或，权利要求9所述试剂盒在制备检测待测样品中目标小分子或其含量产品中的应用；或，权利要求1-8任一中的所述酶标记的识别目标小分子的核酸适配体、权利要求1-8任一中的所述短链互补核酸修饰微孔板在制备检测待测样品中目标小分子或其含量产品中的应用；或，权利要求1-8任一中的所述酶标记的识别目标小分子的核酸适配体、权利要求1-8任一中的所述短链互补核酸修饰微孔板和记载权利要求1-8任一所述方法的可读载体在制备检测待测样品中目标小分子或其含量产品中的应用。
所属类别：	发明专利