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一种光控示踪剂在探测蛋白质的寡聚状态中的应用
| 专利名称： | 一种光控示踪剂在探测蛋白质的寡聚状态中的应用 |
| 摘要： | 本发明属于蛋白质结构检测技术领域，具体涉及一种光控示踪剂在探测蛋白质的寡聚状态中的应用。本发明单体荧光蛋白标记的SxIP模体可以广泛用于探测细胞中蛋白质的寡聚状态，可以准确反映胞内蛋白的真实状态。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 山东;37 |
| 申请人： | 山东大学 |
| 发明人： | 李敏勇;周育斌;杜吕佩 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2018-09-28T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-05-03T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201811139409.6 |
| 公开号： | CN109709080A |
| 代理机构： | 济南圣达知识产权代理有限公司 |
| 代理人： | 王志坤 |
| 分类号： | G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21 |
| 申请人地址： | 250012 山东省济南市历下区文化西路44号 |
| 主权项： | 1.一种光控示踪剂，其特征在于，所述光控示踪剂包含单体荧光蛋白和SxIP模体。 2.根据权利要求1所述光控示踪剂，其特征在于，所述SxIP模体为腺瘤性息肉病菌APC，肌动蛋白DST或基质相互作用分子1的SxIP模体。 3.根据权利要求1所述光控示踪剂，其特征在于，所述腺瘤性息肉病菌APC的SxIP模体为APC2786-2824，氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示；肌动蛋白DST的SxIP模体为DST5469-5485或DST5474-5485；所述DST5469-5485氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；所述DST5474-5485氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示；所述基质相互作用分子1的SxIP模体为STIM1630-685或STIM1630-660；所述STIM1630-685氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示，所述STIM1630-660氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示。 4.根据权利要求1所述光控示踪剂，其特征在于，所述单体荧光蛋白为mCherry、GB1或GFP。 5.根据权利要求1所述光控示踪剂的构建方法，其特征在于：包括以下步骤： (1)通过标准PCR扩增SxIP模体； (2)在pmCherry-C1/下游的BspEI和EcoRI/BamHI位置插入所扩增的SxIP模体，得到mCherry(mCh)标记的SxIP模体，即得。 6.一种利用权利要求1所述示踪剂探测蛋白质的低聚状态的方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)构建如权利要求1所述的光控示踪剂； (2)将待测蛋白质与光控示踪剂进行融合； (3)通过测定荧光信号比率Fcomet/Fcytosol，代入以下公式：所得n值即为待测蛋白质的低聚状态数目。 7.根据权利要求6所述方法，其特征在于，步骤(2)具体步骤为：将待测蛋白质插入到光控示踪剂的单体荧光蛋白和SxIP模体之间。 8.根据权利要求1所述光控示踪剂在探测蛋白质的低聚状态中的应用。 9.根据权利要求1所述光控示踪剂在筛选控制蛋白质二级结构的关键结构子的应用。 10.根据权利要求1所述光控示踪剂在检测触发蛋白质单体到寡聚体转变中的应用。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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