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原文传递一种甲胎蛋白光致电化学传感器的构建

专利名称：	一种甲胎蛋白光致电化学传感器的构建
摘要：	本发明公开了一种甲胎蛋白光致电化学传感器的构建。利用CdS、SnS2和TiO2三种半导体材料构建级联构建传感界面，提高光电转换效率；通过（1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐）与N‑羟基琥珀酰亚胺共价偶联甲胎蛋白捕获抗体特异性识别甲胎蛋白；利用夹心方式结合碱性磷酸酶/甲胎蛋白二抗/金纳米颗粒复合物在抗坏血酸磷酸酯钠溶液中为光致电化学反应提供电子供体；利用三电极体系，波长200 nm~2500 nm的白光氙灯做光源，测定体系光电流，实现对甲胎蛋白的高选择，高灵敏检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	济南大学
发明人：	葛慎光;李娜;付翠萍;于京华;刘海云;颜梅
专利状态：	有效
申请日期：	2019-02-26T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-03T00:00:00+0800
申请号：	CN201910140968.7
公开号：	CN109709176A
代理机构：	济南誉丰专利代理事务所(普通合伙企业)
代理人：	李茜
分类号：	G01N27/26(2006.01);G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	250022 山东省济南市市中区南辛庄西路336号
主权项：	1.一种甲胎蛋白光致电化学传感器的构建，其特征是包括以下步骤：（1）导电玻璃表面生长介孔TiO2微球，通过溶剂热法在TiO2表面生长SnS2量子点，然后进一步生长CdS量子点，制备CdS/SnS2/TiO2修饰导电玻璃的光致电化学传感界面；（2）在步骤（1）中得到的传感界面上固定巯基乙酸，通过（1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐）与N-羟基琥珀酰亚胺共价偶联甲胎蛋白捕获抗体，利用牛血清白蛋白封闭活性位点；（3）在步骤（2）中处理过的的导电玻璃上滴加一定量的甲胎蛋白溶液或者样品孵育25~40 min，采用pH 7.4的磷酸缓冲溶液清洗3次；（4）碱性磷酸酶和甲胎蛋白二抗固定于金纳米颗粒表面，制备得到碱性磷酸酶/甲胎蛋白二抗/金纳米颗粒复合物；（5）将步骤（4）制备得到的碱性磷酸酶/甲胎蛋白二抗/金纳米颗粒复合物滴加于步骤（3）中得到的导电玻璃表面孵育30 min；（6）利用三电极体系，将步骤（5）处理得到的导电玻璃连接工作电极，Pt电极为对电极，Ag/AgCl电极为参比电极，三电极置于含有一定浓度的抗坏血酸磷酸酯钠的pH 7.4的磷酸缓冲溶液中，应用波长200 nm~2500 nm的白光氙灯做光源，外加电压0 V，测定光电流。 2.本发明所述步骤（1）中CdS/SnS2/TiO2/导电玻璃制备具体步骤如下：0.05 g 钛酸四丁酯和3.0 g无水草酸溶于30 mL N,N-二甲基甲酰胺中，取15 mL溶液转移至25 mL聚四氟乙烯内胆不锈钢反应釜中，将导电玻璃置于反应釜中，170 ℃下反应10 h，自然冷却至室温，导电玻璃用乙醇清洗3次，在60 ℃下干燥，然后400 ℃煅烧5 h，得到导电玻璃表面生长介孔TiO2；将TiO2/导电玻璃置于25 mL反应釜中盛有6.0 mmol/L的SnCl4和20 mmol/L的L-半胱氨酸的15 mL溶液中，180 ℃下反应6 h，自然冷却至室温，导电玻璃用乙醇清洗3次，氮气气氛下400 ℃煅烧2h，制备得到SnS2/TiO2/导电玻璃；将SnS2/TiO2/导电玻璃置于由1.0mmol/L的CdSO4、5.0 mmol/L的硫脲和4%的NH3·H2O组成的50 mL溶液，70℃下搅拌3h，冷却后，蒸馏水和乙醇分别洗涤3次，60℃干燥3h，得到CdS/SnS2/TiO2/导电玻璃。 3.本发明步骤（2）中捕获抗体固定于CdS/SnS2/TiO2/导电玻璃制备步骤如下： CdS/SnS2/TiO2/导电玻璃浸入10 mmol/L巯基乙酸溶液中浸泡2h，蒸馏水清洗3次，然后将其浸入0.1 mmol/L （1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐）、0.1 mmol/L N-羟基琥珀酰亚胺混合溶液中浸泡1h，蒸馏水清洗3次，随后在其表面滴加20 μL 20 μg/mL的甲胎蛋白捕获抗体溶液孵育1 h，然后加入0.1% BSA溶液在25 °C下反应30 min。 4.本发明步骤（4）中碱性磷酸酶/甲胎蛋白二抗/金纳米颗粒复合物的制备步骤如下：20 mL质量浓度为0.01 %的氯金酸在搅拌条件下加热煮沸，然后逐滴加入质量浓度为1.5 %的柠檬酸钠0.3 mL继续搅拌，溶液颜色逐渐变蓝最终变成酒红色，然后继续煮沸10 min，停止加热继续搅拌15 min，室温下冷却，制备得到的金纳米溶液；取2 mL金纳米溶液，采用0.2mol/L K2CO3调节金纳米溶液pH为8.2，加入20 μL 1.0 mg/mL的甲胎蛋白二抗和40 μL 1.0mg/mL碱性磷酸酶，室温下震荡2 h，加入200 μL 1 %的牛血清白蛋白孵育30 min，在15000转/分离心10min，清洗3次，转入200 μL 1 %的牛血清白蛋白溶液中，制备得到碱性磷酸酶/甲胎蛋白二抗/金纳米颗粒复合物。
所属类别：	发明专利