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原文传递一种荧光检测脂肪酶活性的方法

专利名称：	一种荧光检测脂肪酶活性的方法
摘要：	本发明属于生物质化学和可再生资源利用领域，具体涉及一种荧光检测脂肪酶活性的方法。本发明将非离子型表面活性剂溶液和姜黄素溶液混合，然后加入可溶性铜盐溶液，得到混合溶液1；将巯基乙酸甲酯溶液和磷酸盐缓冲溶液混合，得到混合溶液2；将混合溶液2和待测脂肪酶样品混合，30～40℃水浴反应10～30min，去除脂肪酶，得到混合溶液3；将混合溶液1和混合溶液3混合，20～40℃反应3～10min；进行荧光检测，然后采用外标法以荧光强度定量待测脂肪酶溶液脂肪酶活性。本发明与现有技术相比，更加灵敏、检测下限更加低，可实现微量级的检测，应用更加广泛。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	佛山科学技术学院
发明人：	马艳玲;陈甜妹;曾荣
专利状态：	有效
申请日期：	2018-11-22T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-07T00:00:00+0800
申请号：	CN201811398159.8
公开号：	CN109724953A
代理机构：	广东广信君达律师事务所
代理人：	杨晓松
分类号：	G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	528000 广东省佛山市南海区狮山镇仙溪水库西路佛山科学技术学院
主权项：	1.一种荧光检测脂肪酶活性的方法，其特征在于包含如下步骤： (1)将非离子型表面活性剂溶液和姜黄素溶液混合，然后加入可溶性铜盐溶液，得到混合溶液1，其中，姜黄素和可溶性铜盐的摩尔比为1:2； (2)将巯基乙酸甲酯溶液和磷酸盐缓冲溶液混合，得到混合溶液2； (3)将混合溶液2和待测脂肪酶样品混合；30～40℃水浴反应10～30min，过滤去除脂肪酶，得到混合溶液3； (4)将混合溶液1和混合溶液3混合，20～40℃反应3～10min；然后进行荧光检测，然后采用外标法以荧光强度定量待测脂肪酶溶液脂肪酶活性。 2.根据权利要求1所述的荧光检测脂肪酶活性的方法，其特征在于：步骤(1)中所述的非离子型表面活性剂为吐温40和TritonX-100中的至少一种。 3.根据权利要求1所述的荧光检测脂肪酶活性的方法，其特征在于：步骤(1)中所述的混合溶液1中非离子型表面活性剂的浓度为100～500μmol/L。 4.根据权利要求1所述的荧光检测脂肪酶活性的方法，其特征在于：步骤(1)中所述的混合溶液1中可溶性铜盐的浓度为0.4～0.6μmol/L。 5.根据权利要求4所述的荧光检测脂肪酶活性的方法，其特征在于：步骤(1)中所述的混合溶液1中可溶性铜盐的浓度为0.5μmol/L。 6.根据权利要求1所述的荧光检测脂肪酶活性的方法，其特征在于：步骤(2)中所述的混合溶液2的pH为6～8。 7.根据权利要求1所述的荧光检测脂肪酶活性的方法，其特征在于：步骤(3)中混合溶液2和待测脂肪酶样品混合后巯基乙酸甲酯的浓度为0.75～1.875mmol/L。 8.根据权利要求7所述的荧光检测脂肪酶活性的方法，其特征在于：步骤(3)中混合溶液2和待测脂肪酶样品混合后巯基乙酸甲酯的浓度为1.125mmol/L。 9.根据权利要求7所述的荧光检测脂肪酶活性的方法，其特征在于：步骤(3)中所述的水浴反应的条件为35℃水浴反应15min。 10.根据权利要求7所述的荧光检测脂肪酶活性的方法，其特征在于：步骤(4)中所述的反应的条件为25℃反应5min。
所属类别：	发明专利