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原文传递一种基于荧光探针的脂肪酶活性检验方法

专利名称：	一种基于荧光探针的脂肪酶活性检验方法
摘要：	本发明公开了一种基于荧光探针的脂肪酶活性检验方法，该方法以柠檬酸为碳源、乙二胺为碳氮源、氯金酸为金源，采用水热法制备了氮金共掺杂碳纳米点作为荧光探针，并将该荧光探针与铜离子和脂肪酶的水解产物混合，利用该荧光探针和脂肪酶水解产物对铜离子作用强度的不同，建立了脂肪酶活性与探针荧光强度间的标准曲线，实现对脂肪酶活性的高效、灵敏、准确检验。通过上述方式，本发明能够有效提高碳纳米点的光学性能和荧光量子产率，使检验具有更高的灵敏度；且该检验方法简单易操作，具有检测速度快、检测范围宽、检出限低等优点，对低活性的脂肪酶也能够进行准确检测，适用范围较广，具有较好的应用前景。
专利类型：	发明专利
申请人：	孙旭东
发明人：	孙旭东
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T03:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T19:00:00+0805
申请号：	CN202010138089.3
公开号：	CN111175271A
分类号：	G01N21/64;G;G01;G01N;G01N21;G01N21/64
申请人地址：	250000 山东省济南市经四纬十路山东省立医院
主权项：	1.一种基于荧光探针的脂肪酶活性检验方法，其特征在于，包括如下步骤： S1、将柠檬酸、乙二胺和氯金酸按照预设摩尔比混合后溶于去离子水中，采用水热法制备氮金共掺杂碳纳米点，作为荧光探针保存备用； S2、将一定活性的脂肪酶标准样品与巯基乙酸甲酯溶液按照预设体积比混合均匀，充分水解反应后，得到水解反应液； S3、将步骤S2得到的水解反应液与铜盐溶液和步骤S1制得的氮金共掺杂碳纳米点按照预设体积比混合均匀，在室温下充分反应后进行荧光检测； S4、调整所述脂肪酶标准样品的活性，重复步骤S2~S3，绘制荧光强度随脂肪酶活性变化的标准曲线； S5、将脂肪酶待测样品代替所述脂肪酶标准样品，按照步骤S2~S3对所述脂肪酶待测样品的荧光强度进行检测，并根据步骤S4得到的标准曲线对所述脂肪酶待测样品的活性进行计算。 2.根据权利要求1所述的一种基于荧光探针的脂肪酶活性检验方法，其特征在于：在步骤S1中，所述柠檬酸、乙二胺和氯金酸的预设摩尔比为100:(10~15):(1~2)。 3.根据权利要求2所述的一种基于荧光探针的脂肪酶活性检验方法，其特征在于：在步骤S1中，所述水热法制备氮金共掺杂碳纳米点包括如下步骤： S11、将柠檬酸、乙二胺和氯金酸按所述预设摩尔比混合后溶于去离子水中，在80℃下加热搅拌10min后，将溶液移入高压釜中，在160℃下加热12h后，冷却至室温，得到氮金共掺杂碳纳米点粗产物； S12、对步骤S11得到的所述氮金共掺杂碳纳米点粗产物进行离心，再用0.22μm的微孔滤膜对离心后的上层清液进行过滤，得到的滤液即为纯化的氮金共掺杂碳纳米点。 4.根据权利要求1所述的一种基于荧光探针的脂肪酶活性检验方法，其特征在于：在步骤S2中，所述脂肪酶标准样品的活性为0~800mU/mL，所述巯基乙酸甲酯溶液的浓度为1~2mmol/L。 5.根据权利要求1所述的一种基于荧光探针的脂肪酶活性检验方法，其特征在于：在步骤S2中，所述脂肪酶标准样品与所述巯基乙酸甲酯溶液的预设体积比为1:25。 6.根据权利要求1所述的一种基于荧光探针的脂肪酶活性检验方法，其特征在于：在步骤S2中，所述水解反应的反应温度为35~40℃，反应时间为15~30min。 7.根据权利要求1所述的一种基于荧光探针的脂肪酶活性检验方法，其特征在于：在步骤S3中，所述水解反应液与铜盐溶液和步骤S1制得的氮金共掺杂碳纳米点的预设体积比为100:(20~25):(6~8)。 8.根据权利要求1所述的一种基于荧光探针的脂肪酶活性检验方法，其特征在于：在步骤S3中，所述铜盐溶液为氯化铜溶液、硫酸铜溶液和硝酸铜溶液中的一种或多种混合；所述铜盐溶液中铜离子的浓度为100μmol/L。 9.根据权利要求1所述的一种基于荧光探针的脂肪酶活性检验方法，其特征在于：在步骤S3中，所述在室温下充分反应的反应时间为5~10min。 10.根据权利要求1所述的一种基于荧光探针的脂肪酶活性检验方法，其特征在于：在步骤S3中，所述荧光检测过程的激发波长为340~370nm，检测波长为450nm。
所属类别：	发明专利