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原文传递一种采用HPLC同时检测酱油中多种生物胺含量的方法

专利名称：	一种采用HPLC同时检测酱油中多种生物胺含量的方法
摘要：	本发明公开了一种采用HPLC同时检测酱油中多种生物胺含量的方法，属于酱油生产质量控制技术领域。包括以下步骤：将生物胺标准品溶液和内标混合，衍生处理后采用HPLC进行分析检测，得到所述生物胺标准品溶液的高效色相色谱图；将各待测样品酱油提取液进行衍生处理后采用HPLC进行分析检测，得到所述酱油提取液的高效液相色谱图；根据步骤（1）和步骤（2）得到的高效液相色谱图，确定所述酱油提取液中生物胺的种类和含量。该方法能更全面、更有效的将酱油中10种主要生物胺做到同时检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	浙江;33
申请人：	灏博农业科技(杭州)有限公司
发明人：	李佳;关荣发;冯纬;张拥军
专利状态：	有效
申请日期：	2019-01-22T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-07T00:00:00+0800
申请号：	CN201910058794.X
公开号：	CN109725095A
代理机构：	杭州浙科专利事务所(普通合伙)
代理人：	吴秉中
分类号：	G01N30/06(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	310018 浙江省杭州市下沙学源街168号逸夫科技楼108室
主权项：	1.一种采用HPLC检测酱油中多种生物胺含量的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）将生物胺标准品溶液和内标混合，衍生处理后采用HPLC进行分析检测，得到所述生物胺标准品溶液的高效色相色谱图；（2）将各待测样品酱油提取液进行衍生处理后采用HPLC进行分析检测，得到所述酱油提取液的高效液相色谱图；（3）根据步骤（1）和步骤（2）得到的高效液相色谱图，确定所述酱油提取液中生物胺的种类和含量。 2.根据权利要求1所述的一种采用HPLC检测酱油中多种生物胺含量的方法，其特征在于所述的生物胺包括腐胺、尸胺、精胺、亚精胺、色胺、苯乙胺、组胺、5-羟色胺、酪胺和胍基丁胺。 3.根据权利要求2所述的一种采用HPLC检测酱油中多种生物胺含量的方法，其特征在于所述标准溶液配置方法：各种生物胺标准品按有效含量用0.1 mol/L HCl溶液配制成1mg/mL的储备液，然后将腐胺、尸胺、精胺、亚精胺、色胺、苯乙胺、组胺、5-羟色胺、酪胺和胍基丁胺10种生物胺储备液分别取相同体积，混合得到浓度为100μg/mL的混合标准品工作液；1mg/mL的内标庚胺储备液同样用0.1mol/L的HCl溶液稀释为100μg/mL的内标工作液；所有溶液均避光保存在4℃的冰箱中。 4.根据权利要求1所述的一种采用HPLC检测酱油中多种生物胺含量的方法，其特征在于所述步骤（1）和步骤（2）中的衍生方法：分别取2mL不同浓度的稀释液，同时添加100 μL的内标工作液（100 μg/mL），1 mLNaOH溶液（2 mol/L），10 μL苯甲酰氯，然后旋涡振荡30 s，在30℃水浴条件下反应40 min，反应20 min时取出并漩涡振荡30 s；反应结束后加入2 mL饱和NaCl溶液终止反应；然后加入3mL乙醚萃取，1000×g离心10 min，移取乙醚层，重复此萃取过程，移取乙醚层合并于规格为10 mL的离心管中，氮气吹干，然后用1 mL乙腈（色谱级）溶解，0.45 μm偏氟膜过滤，待测；每个样品做3个平行；样品避光保存于4℃冰箱中，24 h内完成检测。 5.根据权利要求1所述的一种采用HPLC检测酱油中多种生物胺含量的方法，其特征在于所述HPLC采用乙酸铵-乙腈进行梯度洗脱；所述乙酸铵的浓度为0.005mol/L，所述乙腈为色谱级纯度。 6.根据权利要求5所述的一种采用HPLC检测酱油中多种生物胺含量的方法，其特征在于所述的乙酸铵作为流动相A；所述的乙腈为流动相B；所述梯度洗脱的程序设置为：0-2min为60%流动相A，2-5min为60%流动相A到38%流动相A，5-10min为38%流动相A，10-16min为38%流动相A到20%流动相A，16-20min为20%流动相A，20-21min为20%流动相A到0%流动相A，21-25min为0%流动相A，25-27min为0%流动相A到60%流动相A，27-36min为60%流动相A。 7.根据权利要求1所述的一种采用HPLC检测酱油中多种生物胺含量的方法，其特征在于所述的色谱条件为：色谱柱：Inertsil ODS-3 250 mm×4.6 mm（GL Science Inc., Tokyo, Japan），5 μm；柱温：30℃；进样量：20 μL；紫外检测：254 nm；色谱工作站，美国Waters公司的Breeze系统。 8.根据权利要求1所述的一种采用HPLC检测酱油中多种生物胺含量的方法，其特征在于所述的生物胺提取方法为：吸取5.0 mL待测样品置于50 mL离心管中，加250 μL内标（1000 μg/mL庚胺储备液），再加20 mL 0.4 mol/L高氯酸溶液分散，均质1 min，振荡提取5min，静置5 min，然后5000×g离心35 min；将上清液移入50 mL容量瓶中，用20 mL高氯酸溶液重复提取1次，上清液合并至相应容量瓶中，用0.4 mol/L高氯酸溶液定容至刻度，取2 mL该溶液，衍生处理；本试验中对每个样品的处理均重复3次。 9.根据权利要求1所述的一种一种采用HPLC检测酱油中多种生物胺含量的方法，其特征在于所述混合标准衍生样品进行精密度测定，测定方法为取质量浓度为10 μg/mL 的混合标准衍生样品，平行进样6次，根据测定结果计算相对标准偏差RSD。 10.根据权利要求1所述的一种采用HPLC检测酱油中多种生物胺含量的方法，其特征在于对质量浓度为0.1 μg/mL的混合标准品衍生物用乙腈稀释，以信噪比（S/N）大于3作为检出限的判断标准，以信噪比（S/N）大于10作为定量限的判断标准。
所属类别：	发明专利