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原文传递一种检测苹果中噻苯咪唑的试剂盒及其检测方法

专利名称：	一种检测苹果中噻苯咪唑的试剂盒及其检测方法
摘要：	一种检测噻苯咪唑的试剂盒及其检测方法用于对苹果中噻苯咪唑含量的检测。本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被噻苯咪唑抗原，样本中噻苯咪唑和此抗原竞争抗噻苯咪唑抗体（抗试剂），同时抗噻苯咪唑抗体与酶标二抗（酶标物）相结合，经TMB底物显色，样本吸光值与其含有的噻苯咪唑成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中噻苯咪唑的含量。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	镇江华维检测技术有限公司
发明人：	杜霞;洪霞;立雯馨
专利状态：	有效
申请日期：	2017-11-05T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-14T00:00:00+0800
申请号：	CN201711073580.7
公开号：	CN109752551A
分类号：	G01N33/577(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	212009 江苏省镇江市新区丁卯经十五路99号11幢
主权项：	1.一种检测苹果中噻苯咪唑的试剂盒由盒体，酶标板一块，标准液6瓶（1 mL/瓶）：0ppb； 0.6ppb；1.8ppb；5.4ppb；16.2ppb；48.6ppb，酶标物1瓶（6 mL），显色液A（6 mL），显色液B（6 mL），终止液（6 mL）浓缩洗涤液10×（40 mL），浓缩样品稀释液5×（20 mL），海绵托架所组成；海绵托架内装有试剂瓶，海绵托架和酶标板均安装在盒体内。 2.根据权利要求1所述一种检测噻苯咪唑的试剂盒，其特征在于所述的海绵托架上制有孔和凹槽。 3.根据权利要求1所述一种检测噻苯咪唑的试剂盒，其特征在于所述的酶标板有塑料支架和各自分开的带孔穴的塑料条组成。 4.一种检测噻苯咪唑的试剂盒及用该试剂盒检测噻苯咪唑的方法，其特征在于抗体的特异性，本方法抗体制备选择了与噻苯咪唑和牛血清白蛋白进行交叉反应；本方法在对抗噻苯咪唑杂交瘤细胞株大量筛选的基础上，得到了1株能分泌抗噻苯咪唑的杂交瘤细胞株；本研究成功地筛选出能够分泌抗噻苯咪唑的单克隆抗体杂交瘤细胞株，制备出对噻苯咪唑具有高亲合力、高特异性的单克隆抗体，并建立了快速、灵敏的检测苹果中噻苯咪唑污染水平的酶联免疫吸附试验检测方法，为苹果的快速筛检提供了技术支持。 5.一种检测噻苯咪唑的试剂盒及用该试剂盒检测噻苯咪唑的方法，配液1：样品稀释液；用去离子水将噻苯咪唑浓缩样品稀释液按1：4体积比进行稀释，即1份噻苯咪唑浓缩样品稀释液加4份去离子水；用于提取样本的稀释，样品稀释液在4℃环境可保存一个月；配液2：洗涤工作液；用去离子水将浓缩洗涤液（10×）按1：9体积比进行稀释，即1份浓缩洗涤液（10×）加9份去离子水；用于酶标板的洗涤，洗涤工作液在4℃环境可保存一个月。 6.一种检测噻苯咪唑的试剂盒及用该试剂盒检测噻苯咪唑的方法其特征在于进行样品前处理：苹果：1、取1g均质样本于50 mL离心管中，加入5 mL水，剧烈振荡1 min；2、加入5mL乙腈，剧烈振荡3 min，4000g以上离心5 min；3、取1ml上清液于10ml玻璃试管中，50～60℃水浴氮气流下吹干；4、加入1ml正已烷用涡旋仪涡动30s，再加入1mL样品稀释液，涡动30s， 4000 r/min离心5 min；5、除去上层有机相，将下层液体转移到另一洁净离心管中，用于检测。 7.一种检测噻苯咪唑的试剂盒及用该试剂盒检测噻苯咪唑的方法，其特征在于在酶标板微孔条上预包被噻苯咪唑抗原，洗版，然后用封闭液进行封闭，拍干；加标准品/样本50 μL到对应的微孔中，加入酶标物50 μL/孔，再加入抗体工作液50 μL/孔轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置室温25℃避光反应30 min；小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，加洗涤液 300μL /孔，每次浸泡15~30 s，充分洗涤4~5次，用吸水纸拍干；加入显色液A 50 μL/孔，轻轻振荡混匀，再加入显色液B 50 μL /孔，用盖板膜盖板后置室温避光反应15~20 min；每孔各加50 μL终止液，轻轻振荡混匀，设定酶标仪在450 nm处，测定OD值（建议用450/630 nm双波长检测，在5 min内读完数据）。
所属类别：	发明专利