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原文传递一种绿脓杆菌抗体ELISA快速检测试剂盒及检测方法

专利名称：	一种绿脓杆菌抗体ELISA快速检测试剂盒及检测方法
摘要：	一种绿脓杆菌抗体ELISA快速检测试剂盒及检测方法，属于抗体检测领域，能够实现对水貂血清中绿脓杆菌抗体水平的快速检测。本发明的检测试剂盒包括：包被抗原、包被缓冲液、2％BSA封闭液、PBST洗涤缓冲液、一抗阳性血清、阴性对照血清、样品稀释液、酶标二抗、底物显色液和终止液；包被抗原为用包被缓冲液稀释成浓度为107～109cfu/mL的病原菌液；一抗阳性血清是以绿脓杆菌为抗原，免疫水貂获得的血清；阴性对照血清为未进行免疫的水貂血清。本发明具有特异性好、灵敏度高、重复性好、快速、简便、准确等特点，同时还具有结果稳定、使用范围广的优点，可用于水貂血清中绿脓杆菌抗体的大规模检测，有利于了解整个水貂群绿脓杆菌病抗体的状况。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	吉林;22
申请人：	吉林特研生物技术有限责任公司
发明人：	刘振扬;许皓;明迪;任飞;李云松;王春霞;王玉明;杨升;刘建荣
专利状态：	有效
申请日期：	2019-01-09T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-21T00:00:00+0800
申请号：	CN201910018586.7
公开号：	CN109781995A
代理机构：	长春众邦菁华知识产权代理有限公司
代理人：	于晓庆
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	130000 吉林省长春市净月经济开发区柳莺西路388号
主权项：	1.一种绿脓杆菌抗体ELISA快速检测试剂盒，其特征在于，包括：包被抗原、包被缓冲液、2％BSA封闭液、PBST洗涤缓冲液、一抗阳性血清、阴性对照血清、样品稀释液、酶标二抗、底物显色液和终止液；所述包被抗原为用包被缓冲液稀释成浓度为107～109cfu/mL的病原菌液；所述一抗阳性血清是以绿脓杆菌为抗原，免疫水貂获得的血清；所述阴性对照血清为未进行免疫的水貂血清。 2.根据权利要求1所述的一种绿脓杆菌抗体ELISA快速检测试剂盒，其特征在于，所述包被缓冲液为0.05M的碳酸盐缓冲液，pH为9.6。 3.根据权利要求1所述的一种绿脓杆菌抗体ELISA快速检测试剂盒，其特征在于，所述2％BSA封闭液为质量浓度1～5％的牛血清蛋白溶液。 4.根据权利要求1所述的一种绿脓杆菌抗体ELISA快速检测试剂盒，其特征在于，所述PBST洗涤缓冲液为0.15M的PBS溶液。 5.根据权利要求1所述的一种绿脓杆菌抗体ELISA快速检测试剂盒，其特征在于，所述样品稀释液为0.05M的碳酸盐缓冲液，pH为9.6。 6.根据权利要求1所述的一种绿脓杆菌抗体ELISA快速检测试剂盒，其特征在于，所述酶标二抗为兔抗貂IgG-HRP酶标抗体。 7.根据权利要求1所述的一种绿脓杆菌抗体ELISA快速检测试剂盒，其特征在于，所述底物显色液为可溶型单组分TMB四甲基联苯胺底物溶液。 8.根据权利要求1所述的一种绿脓杆菌抗体ELISA快速检测试剂盒，其特征在于，所述终止液为2M的H2SO4。 9.采用权利要求1至8中任意一项所述的试剂盒实现的一种绿脓杆菌抗体ELISA快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、抗原包被用包被缓冲液将病原菌稀释成浓度为107～109cfu/mL的病原菌液；设被检样品孔、阴性对照孔和空白对照孔，被检样品孔和阴性对照孔内分别加入上述病原菌液，加入量为50～150μL/孔，空白对照孔内加入包被缓冲液进行包被，加入量为100～300μL/孔；步骤二、洗板每个酶标板孔内加入100～300μL PBST洗涤缓冲液，静置3～5min，甩去洗液，在吸水纸上拍干，重复3～5次；步骤三、封闭每个酶标板孔内加入100～300μLBSA封闭液，封闭30～120min；空白对照孔不加任何试剂；步骤四、洗板重复步骤二；步骤五、加一抗阳性血清用样品稀释液将一抗阳性血清按1:(100～1000)倍稀释；被检样品孔加入一抗阳性血清，阴性对照孔加入阴性对照血清，加入量均为50～150μL/孔，37℃孵育30～90min；空白对照孔不加任何试剂；步骤六、洗板重复步骤二；步骤七、加酶标二抗用样品稀释液将酶标二抗按1:(2500～7500)倍稀释；每个酶标板孔内加入50～150μL的酶标二抗，37℃孵育30～90min；步骤八、洗板重复步骤二；步骤九、加底物每个酶标板孔内加入50～150μL底物显色液，37℃避光反应5～20min；步骤十、终止反应每个酶标板孔内加入50μL终止液；步骤十一、结果判断在酶标仪中读取D450nm处的吸光度值；当被检样品的OD450值＞X+3SD时，判定为阳性；当被检样品的OD450值＜X+2SD时，判定为阴性；介于两者之间判定为可疑；X为吸光度值的平均值，SD为标准方差。
所属类别：	发明专利