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原文传递一种基于G-四联体DNA的Pb2+荧光传感检测方法

专利名称：	一种基于G-四联体DNA的Pb2+荧光传感检测方法
摘要：	本发明属于荧光检测技术领域，提出一种基于G‑四联体DNA的Pb2+荧光传感检测方法。本发明利用Pb2+稳定的G‑四链体DNA结构与Ru(bpy)2(dppz)2+荧光探针特异性作用产生较强的荧光信号，制备了检测Pb2+的荧光生物传感器。本发明提出G‑四联体DNA在Pb2+的荧光检测中的应用，建立、完善和发展了Pb2+污染物的生物传感分析方法，不仅可以为环境健康风险评价提供参考，同时有利于开发一种新的简单、快速、高灵敏、高选择性、低成本的检测方法，对完善现有Pb2+污染物检测技术手段具有重要意义和较好的应用价值。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	北京农业质量标准与检测技术研究中心
发明人：	梁刚;潘立刚;李安;付海龙
专利状态：	有效
申请日期：	2018-12-25T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-24T00:00:00+0800
申请号：	CN201811595173.7
公开号：	CN109799215A
代理机构：	北京路浩知识产权代理有限公司
代理人：	王文君;陈征
分类号：	G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	100097 北京市海淀区曙光花园中路9号
主权项：	1.G-四联体DNA在Pb2+荧光传感检测中的应用。 2.G-四联体DNA、Ru(bpy)2(dppz)2+共存体系为荧光信号探针在Pb2+荧光传感检测中的应用。 3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述G-四联体DNA序列如SEQ ID NO.1、2、3或4所示。 4.一种基于G-四联体DNA的Pb2+荧光传感检测方法，其特征在于，包括： 1)利用标准浓度的Pb2+制备Pb2+、G-四联体DNA、Ru(bpy)2(dppz)2+共存体系，进行荧光信号检测，构建Pb2+浓度与荧光信号强度响应的标准曲线； 2)制备待测样品、G-四联体DNA、Ru(bpy)2(dppz)2+共存体系，进行荧光信号检测，获得荧光信号强度； 3)根据测得的荧光信号强度以及所述标准曲线，得出待测样品中的Pb2+浓度。 5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，制备步骤1)、2)所述共存体系所用缓冲液由KH2PO4，K2HPO4、磷酸、NaHCO3、Na2CO3、NaOH、Tris、HClO4、HCl、柠檬酸、柠檬酸钠中的二种或三种配制而得，优选所用缓冲液为20mM Tris-HClO4缓冲溶液，pH为7.4。 6.根据权利要求4或5所述的检测方法，其特征在于，步骤1)、2)所述共存体系的pH为6.0-11.0。 7.根据权利要求4-6任一项所述的检测方法，其特征在于，步骤1)、2)所述共存体系中，G-四联体DNA浓度为0.1-100μM，Ru(bpy)2(dppz)2+浓度为0.1-200μM；优选地，G-四联体DNA与Ru(bpy)2(dppz)2+的摩尔浓度比为1:0.1-10，更优选为1:1。 8.根据权利要求4-6任一项所述的检测方法，其特征在于，孵育步骤1)、2)所述共存体系的时间为1-10min。 9.根据权利要求4-6任一项所述的检测方法，其特征在于，步骤2)包括以下步骤： a)将G-四联体DNA用适量20mM Tris-HClO4缓冲液(pH 7.4)溶解，混匀，置于70-90℃的水浴锅中加热活化处理1-10min，自然冷却至室温，备用； b)取适量步骤a)配制的G-四联体DNA溶液加到冻存管中，并用20mM Tris-HClO4缓冲液(pH 7.4)稀释到一定浓度，向其中加入一定量的待测样品，混匀，室温下孵育1-4h，备用； c)取适量Ru(bpy)2(dppz)2+溶液，加入步骤b)配制的待测样品、G-四联体DNA、Ru(bpy)2(dppz)2+共存体系中，混匀，共孵育1-10min；进行荧光信号检测，获得荧光信号强度。 10.根据权利要求4-9任一项所述的检测方法，其特征在于，所述G-四联体DNA序列如SEQ ID NO.1、2、3或4所示。
所属类别：	发明专利