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原文传递甲功五项的荧光微球联合检测装置及其制备方法

专利名称：	甲功五项的荧光微球联合检测装置及其制备方法
摘要：	本发明涉及一种甲功五项的荧光微球联合检测装置及其制备方法，属于医疗检测设备领域。样品垫、免疫荧光交联抗体玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜、吸收垫分别粘贴在塑料板，所述硝酸纤维素膜的两端分别与吸收垫、免疫荧光交联抗体玻璃纤维膜搭接，免疫荧光交联抗体玻璃纤维膜另一端与样品垫搭接；所述硝酸纤维素膜上设置检测线T和质控线C；检测线分别标记甲状腺素抗体、三碘甲状腺原氨酸抗体、促甲状腺激素抗体，质控线C上喷点羊抗鼠IgG多克隆抗体。优点是将甲状腺素、三碘甲状腺原氨酸和促甲状腺激素抗体包被于硝酸纤维膜膜上，特异性强，能同时检测标本中T3抗体、T4抗体、TSH抗体、游离T3抗体、游离T4抗体，操作简便，实用性强。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	吉林;22
申请人：	吉林双正生物工程有限公司
发明人：	李志兴;赵旻;李欣
专利状态：	有效
申请日期：	2019-02-06T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-24T00:00:00+0800
申请号：	CN201910109523.2
公开号：	CN109799355A
代理机构：	吉林长春新纪元专利代理有限责任公司
代理人：	魏征骥
分类号：	G01N33/78(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	130000 吉林省长春市北湖科技开发区盛北大街3333号
主权项：	1.一种甲功五项的荧光微球联合检测装置，其特征在于：是由以下五种检测装置组成：检测装置一：样品垫一、免疫荧光交联甲状腺素T4抗体玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜、吸收垫分别粘贴在塑料板，所述硝酸纤维素膜的两端分别与吸收垫、免疫荧光交联甲状腺素T4抗体玻璃纤维膜搭接，所述免疫荧光交联甲状腺素T4抗体玻璃纤维膜的另一端与样品垫一搭接；所述硝酸纤维素膜上设置检测线TT4和质控线C，该检测线TT4标记甲状腺素T4抗体；所述的质控线C上喷点羊抗鼠IgG多克隆抗体；检测装置二：样品垫一、免疫荧光交联三碘甲状腺原氨酸T3抗体玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜、吸收垫分别粘贴在塑料板，所述硝酸纤维素膜的两端分别与吸收垫、免疫荧光交联三碘甲状腺原氨酸T3抗体玻璃纤维膜搭接，所述免疫荧光交联三碘甲状腺原氨酸T3抗体玻璃纤维膜的另一端与样品垫一搭接；所述硝酸纤维素膜上设置检测线TT3和质控线C，该检测线TT3标记三碘甲状腺原氨酸T3抗体；所述的质控线C上喷点羊抗鼠IgG多克隆抗体；检测装置三：样品垫一、免疫荧光交联促甲状腺激素TSH抗体玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜、吸收垫分别粘贴在塑料板，所述硝酸纤维素膜的两端分别与吸收垫、免疫荧光交联促甲状腺激素TSH抗体玻璃纤维膜搭接，所述免疫荧光交联促甲状腺激素TSH抗体玻璃纤维膜的另一端与样品垫一搭接；所述硝酸纤维素膜上设置检测线TTSH和质控线C，该检测线TTSH标记促甲状腺激素TSH抗体；所述的质控线C上喷点羊抗鼠IgG多克隆抗体；检测装置四：样品垫二、免疫荧光交联三碘甲状腺原氨酸T3抗体玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜、吸收垫分别粘贴在塑料板，所述硝酸纤维素膜的两端分别与吸收垫、免疫荧光交联三碘甲状腺原氨酸T3抗体玻璃纤维膜搭接，所述免疫荧光交联三碘甲状腺原氨酸T3抗体玻璃纤维膜的另一端与样品垫二搭接；所述硝酸纤维素膜上设置检测线TT3和质控线C，该检测线TTSH标记三碘甲状腺原氨酸T3抗体；所述的质控线C上喷点羊抗鼠IgG多克隆抗体；检测装置五：样品垫二、免疫荧光交联甲状腺素T4抗体玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜、吸收垫分别粘贴在塑料板，所述硝酸纤维素膜的两端分别与吸收垫、免疫荧光交联甲状腺素T4抗体玻璃纤维膜搭接，所述免疫荧光交联甲状腺素T4抗体玻璃纤维膜的另一端与样品垫二搭接；所述硝酸纤维素膜上设置检测线TT4和质控线C，该检测线TT4标记甲状腺素T4抗体；所述的质控线C上喷点羊抗鼠IgG多克隆抗体。 2.如权利要求1所述一种甲功五项的荧光微球联合检测装置的制备方法，其特征在于，包括下列步骤： (a)免疫荧光微球的制备，取100ul固含为1％的微球悬浮液，用超纯水稀释10倍,即1000ul，加入到EP管中，取40ul的N-羟基琥珀酰亚胺液(NHS)加入微球悬浮液中混匀，然后接着加入40ul的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐液(EDC)加入微球悬浮液液中混匀，常温下反应0.5小时，将反应后的悬浮液用超声波超声，使管壁上的微球重新悬浮在水溶液中，然后将微球悬浮液离心，离心条件8000～14000r/min、15～25min，倒掉上清液，加入1ml超纯水，然后用超声波超声分散均匀； (b)免疫荧光微球分别交联甲状腺素T4抗体、三碘甲状腺原氨酸T3抗体、促甲状腺激素TSH抗体，取1ml活化后的微球悬浮液，超声分散均匀，然后边搅拌边分别滴加抗体；加入抗体后，反应1～1.5min后，再到超声波上超声25～35秒，然后再反应1～1.5小时，加牛血清白蛋白BSA分别进行封闭1～1.5小时，将封闭好的微球分别进行离心，速度为8000～14000r/min,15～20min，将缓冲液分别加入到离心后的免疫荧光微球中，使各微球分散均匀，待用； (c)采用缓冲液稀释步骤(b)的免疫荧光微球获得免疫荧光微球溶液，用免疫荧光微球溶液分别喷涂于玻璃纤维垫，分别制得免疫荧光交联甲状腺素T4抗体玻璃纤维膜、免疫荧光交联三碘甲状腺原氨酸T3抗体玻璃纤维膜和免疫荧光交联促甲状腺激素TSH抗体玻璃纤维膜； (d)将硝酸纤维素膜用聚乙烯醇处理液预处理后，分别喷点与石墨纳米颗粒结合的甲状腺素T4抗体、三碘甲状腺原氨酸T3抗体、促甲状腺激素TSH抗体、甲状腺素T4抗体、三碘甲状腺原氨酸T3抗体为检测线T，喷点羊抗兔IgG抗体作为质控线，各检测线喷点量1ul/cm，制得各硝酸纤维素膜； (e)五种检测装置的制备，其中制备检测装置一：将预处理的样品垫一、步骤(c)制备的免疫荧光交联甲状腺素T4抗体玻璃纤维膜，步骤(d)制备的硝酸纤维素膜、且其喷点与石墨纳米颗粒结合的甲状腺素T4抗体为检测线TT4、喷点羊抗兔IgG抗体作为质控线，吸收垫分别依次粘贴在塑料板上，切裁制得检测试剂条，最后将检测试剂条分别装入塑料外壳；制备检测装置二：将预处理的样品垫一、步骤(c)制备的免疫荧光交联三碘甲状腺原氨酸T3抗体玻璃纤维膜，步骤(d)制备的硝酸纤维素膜、且其喷点与石墨纳米颗粒结合的三碘甲状腺原氨酸T3抗体为检测线TT3、喷点羊抗兔IgG抗体作为质控线，吸收垫分别依次粘贴在塑料板上，切裁制得检测试剂条，最后将检测试剂条分别装入塑料外壳；制备检测装置三：将预处理的样品垫一、步骤(c)制备的免疫荧光交联促甲状腺激素TSH抗体玻璃纤维膜，步骤(d)制备的硝酸纤维素膜、且其喷点与石墨纳米颗粒结合的促甲状腺激素TSH抗体为检测线TTSH、喷点羊抗兔IgG抗体作为质控线，吸收垫分别依次粘贴在塑料板上，切裁制得检测试剂条，最后将检测试剂条分别装入塑料外壳；制备检测装置四：将预处理的样品垫二、步骤(c)制备的三碘甲状腺原氨酸T3抗体玻璃纤维膜，步骤(d)制备的硝酸纤维素膜、且其喷点与石墨纳米颗粒结合的三碘甲状腺原氨酸T3抗体为检测线TT3、喷点羊抗兔IgG抗体作为质控线，吸收垫分别依次粘贴在塑料板上，切裁制得检测试剂条，最后将检测试剂条分别装入塑料外壳；制备检测装置五：将预处理的样品垫二、步骤(c)制备的甲状腺素T4抗体玻璃纤维膜，步骤(d)制备的硝酸纤维素膜、且其喷点与石墨纳米颗粒结合的甲状腺素T4抗体为检测线TT4、喷点羊抗兔IgG抗体作为质控线，吸收垫分别依次粘贴在塑料板上，切裁制得检测试剂条，最后将检测试剂条分别装入塑料外壳。 3.根据权利要求2所述一种甲功五项的荧光微球联合检测装置的制备方法，其特征在于：所述步骤(b)、(c)的球缓冲液由Tris-HCL液、蔗糖、海藻糖、牛血清白蛋白BSA组成，pH值8.5，其中Tris-Hcl浓度为0.02mol/L，蔗糖浓度为5～20％，海藻糖浓度为1～5％，牛血清白蛋白BSA浓度为0.5～1％。 4.根据权利要求2所述一种甲功五项的荧光微球联合检测装置的制备方法，其特征在于：所述步骤(d)与石墨纳米颗粒结合的甲状腺素T4抗体、三碘甲状腺原氨酸T3抗体、促甲状腺激素TSH抗体的制备方法是：以石墨作为载体，取200μL、浓度1mg/mL石墨纳米颗粒溶液和25μL、浓度40μmol/L甲状腺素T4、三碘甲状腺原氨酸T3、促甲状腺激素TSH抗体溶液加入到超纯水中，使最终反应体系1mL，充分混匀后，设置摇床温度为25℃，转速为200～300r/m条件下，将上述混合溶液分别在摇床内避光震荡培养2～3h，反应后的各混合溶液用超速离心机在13 000r/m转速条件下，使用超纯水分别彻底离心洗涤3～4次，分别去除上清液中过量的未反应的甲状腺素T4抗体、三碘甲状腺原氨酸T3抗体、促甲状腺激素TSH抗体，所得沉淀物即为石墨-甲状腺素T4抗体探针复合物、石墨-三碘甲状腺原氨酸T3抗体探针复合物、石墨-促甲状腺激素TSH抗体探针复合物，用超纯水将其定容至1mL，并在4℃条件储存。 5.根据权利要求2所述一种甲功五项的荧光微球联合检测装置的制备方法，其特征在于：所述步骤(d)中的聚乙烯醇处理液由聚乙烯醇与Triton X-100混合后配成1％，经0.22μm滤膜过滤，备用。 6.根据权利要求2所述一种甲功五项的荧光微球联合检测装置的制备方法，其特征在于：所述步骤(e)中的预处理的检测装置一样品垫一、检测装置二样品垫一、检测装置三样品垫一采用样品垫处理液一200ul/cm，所述样品垫处理液一由Tris-HCL液、牛血清白蛋白BSA、酪蛋白、表面活性剂Tween-80组成，其中Tris-HCL液浓度为0.1mol/L，牛血清白蛋白BSA浓度为1％，酪蛋白浓度为0.2％、表面活性剂Tween-80浓度为1％；所述步骤(e)中的预处理的检测装置四样品垫二、检测装置五样品垫二采用样品垫处理液二200ul/cm，所述样品垫处理液二由Tris-HCL液、牛血清白蛋白BSA、酪蛋白、表面活性剂Tween-80组成，其中Tris-HCL液浓度为0.1mol/L，牛血清白蛋白BSA浓度为1％，酪蛋白浓度为0.2％、表面活性剂浓度为1％和抗甲状腺球蛋白抗体10ug/ml组成。
所属类别：	发明专利