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原文传递一种快速检测甘胆酸的表面等离子共振分析方法

专利名称：	一种快速检测甘胆酸的表面等离子共振分析方法
摘要：	本发明涉及一种快速检测甘胆酸的表面等离子共振分析方法。所述方法包括如下步骤：S1：采用混合酸酐法将甘胆酸与卵清蛋白进行偶联，透析纯化后得到包被抗原；S2：将得到的包被抗原通过NHS/EDC法偶联到富含羟基的葡聚糖基质的CM5芯片上，并对未反应的活性位点进行封闭；S3：利用CM5芯片对甘胆酸进行检测。该方法直接利用甘胆酸偶联卵清蛋白形成检测受体，与甘胆酸小分子进行抗甘胆酸多克隆抗体竞争，通过在金膜上结合形成的竞争信号的差异来的对甘胆酸进行定量分析，可实现自动化，实时检测，更加直观反映甘胆酸含量水平，特异性高，灵敏度好，单个样检测时间在10 min内，具有快速、准确、可靠的优点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	广东工业大学
发明人：	赵肃清;何绮怡;杨慧怡;陈莹珊;贺攀;方岩雄
专利状态：	有效
申请日期：	2019-02-20T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-24T00:00:00+0800
申请号：	CN201910127351.1
公开号：	CN109799337A
代理机构：	广州粤高专利商标代理有限公司
代理人：	林丽明
分类号：	G01N33/548(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	510006 广东省广州市番禺区大学城外环西路100号
主权项：	1.一种快速检测甘胆酸的表面等离子共振分析方法，其特征在于，包括如下步骤： S1：采用混合酸酐法将甘胆酸与卵清蛋白进行偶联，透析纯化后得到包被抗原； S2：将得到的包被抗原通过NHS/EDC法偶联到富含羟基的葡聚糖基质的CM5芯片上，并对未反应的活性位点进行封闭； S3：利用CM5芯片对甘胆酸进行检测。 2.根据权利要求1所述快速检测甘胆酸的表面等离子共振分析方法，其特征在于，S1中混合酸酐法的过程如下：甘胆酸和(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶于水中，加入N-羟基琥珀酰亚胺，搅拌过夜后加入到含有卵清蛋白的磷酸缓冲盐溶液，搅拌反应，透析纯化即得包被抗原。 3.根据权利要求2所述快速检测甘胆酸的表面等离子共振分析方法，其特征在于，所述甘胆酸和卵清蛋白的质量比为1:4~7；所述甘胆酸和(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的质量比为1:0.5~1；所述甘胆酸和N-羟基琥珀酰亚胺的质量比为1:1~2。 4.根据权利要求1所述快速检测甘胆酸的表面等离子共振分析方法，其特征在于，所述搅拌的温度为4℃。 5.根据权利要求1所述快速检测甘胆酸的表面等离子共振分析方法，其特征在于，S2中NHS/EDC法包括如下步骤： S201：包被抗原在CM5芯片上的预富集； S202：CM5芯片上的葡聚糖羧基的活化； S203：卵清蛋白的氨基和检测基质的羧基偶联； S204：利用乙醇胺封闭未反应的活性位点。 6.根据权利要求1所述快速检测甘胆酸的表面等离子共振分析方法，其特征在于， S201的具体过程为：将包被抗原溶于不同pH的醋酸钠缓冲液，以10 μL/min的流速流经CM5芯片，然后用NaOH溶液洗脱，4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸缓冲液冲洗回复基线； S202的具体过程为：EDC溶液和NHS溶液分别以10~30 μL/min的流速通过CM5芯片，以活化葡聚糖上的羟基； S203的具体过程为：将包被抗原溶于pH为4.0的醋酸钠缓冲液中，以10 μL/min的流速通过芯片，实现卵清蛋白的氨基和检测基质的羧基偶联； S204的具体过程为：利用1 mol/L的乙醇胺溶液对未反应的活性位点进行封闭。 7.根据权利要求6所述快速检测甘胆酸的表面等离子共振分析方法，其特征在于，S201中所述包被抗原的浓度为0.05 mg/mL；所述醋酸钠缓冲液的pH为4.0、4.5、5.0和5.5，每个pH的醋酸钠缓冲液流经CM5芯片的时间为2 min；所述NaOH溶液的浓度为50 mmol/L。 8.根据权利要求6所述快速检测甘胆酸的表面等离子共振分析方法，其特征在于，S202中EDC溶液的浓度为100~400 mmol/L；所述NHS溶液的浓度为100~400 mmol/L。 9.根据权利要求1所述快速检测甘胆酸的表面等离子共振分析方法，其特征在于，S3步骤前还包括建立甘胆酸的表面等离子共振分析的标准曲线的步骤。
所属类别：	发明专利