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一种橘青霉发酵液中还原糖的检测方法
| 专利名称： | 一种橘青霉发酵液中还原糖的检测方法 |
| 摘要： | 本发明涉及检测技术领域，公开了一种微生物发酵液中还原糖的检测方法，包括最佳DNS溶液配方选择的方法、最适反应时间选择和最优紫外测定波长确定。本发明使用DNS还原显色的方法检测橘青霉发酵液中还原糖的含量，通过还原糖含量的变化，判断橘青霉生长状态和生长环境，实现发酵生产过程中的有效控制，该方法简单易操作。本发明使用3,5‑二硝基水杨酸显色代替传统的碘酸滴定，还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5‑二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3‑氨基‑5‑硝基水杨酸，在碱性溶液中此化合物呈橘红色，在一定的浓度范围内还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的还原糖的含量。本发明的检测方法可以定量检测橘青霉发酵液中还原糖含量，容易操作，准确性和稳定性高。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 江苏;32 |
| 申请人： | 南京同凯兆业生物技术有限责任公司 |
| 发明人： | 陈海波;陈晓春;张磊;蔡家栋 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2018-12-29T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-05-31T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201811641925.9 |
| 公开号： | CN109827920A |
| 代理机构： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) |
| 代理人： | 丁静静;肖明芳 |
| 分类号： | G01N21/33(2006.01);G;G01;G01N;G01N21 |
| 申请人地址： | 211806 江苏省南京市浦口区双峰路8号 |
| 主权项： | 1.一种橘青霉发酵液中还原糖的检测方法，其特征在于，包括如下步骤： (1)取待测橘青霉发酵液与显色试剂DNS溶液混合，得到混合液，所述DNS溶液的配方如下：0.028mol/L 3,5-二硝基水杨酸、2mol/L NaOH、0.914mol/L酒石酸钾钠、0.053mol/L苯酚、0.040mol/L亚硫酸钠； (2)在DNS溶液中加入与待测样品等体积的去离子水，作为空白对照； (3)将步骤(1)得到的混合液和空白对照在沸水浴中加热，再冷却至室温，在最适紫外波长处测定吸光度； 按下式计算橘青霉发酵液中还原糖含量： 还原糖浓度(mg/ml)＝X*N 式中 A为混合反应样测得紫外吸光度； B为空白样测得紫外吸光度； X为由(B-A)查得葡萄糖标准曲线还原糖的毫克数mg； N为稀释倍数N。 2.根据权利要求1所述的橘青霉发酵液中还原糖的检测方法，其特征在于，所述葡萄糖标准曲线制作方法如下： 配置不同浓度梯度的葡萄糖溶液，将其与DNS溶液混合，在沸水浴中加热，再冷却至室温，紫外分光光度计520nm处测定吸光度，以吸光度值为纵坐标，葡萄糖含量为横坐标，做出标准曲线。 3.根据权利要求1所述的橘青霉发酵液中还原糖的检测方法，其特征在于，橘青霉酶液与DNS的体积比为1:3。 4.根据权利要求2所述的所述的橘青霉发酵液中还原糖的检测方法，其特征在于，步骤(3)中沸水浴中加热时间为4～25min。 5.根据权利要求2所述的橘青霉发酵液中还原糖的检测方法，其特征在于，步骤(3)中测定的紫外波长为450～580nm。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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