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基于靶标激发金纳米粒子表面DNA循环的蛋白质荧光分析方法
| 专利名称： | 基于靶标激发金纳米粒子表面DNA循环的蛋白质荧光分析方法 |
| 摘要： | 本发明涉及一种基于靶标激发金纳米粒子表面DNA循环的蛋白质荧光分析方法。该分析方法的检测溶液包括修饰发卡DNA1的金纳米粒子Au‑DNA1、双链DNA识别探针DNA2/DNA3、单链DNA识别探针DNA4和核酸外切酶Nt.BbvCI。DNA1上标记有荧光染料，此荧光染料的荧光被金纳米粒子猝灭。当靶标蛋白存在时，可被识别探针夹心识别，基于邻位效应，DNA4取代DNA2与DNA3杂交，释放的DNA2与Au‑DNA1杂交，激活酶切位点，引发Nt.BbvCI对DNA1的酶切，使得荧光染料远离金纳米粒子表面恢复荧光，此酶切反应可在金纳米粒子表面循环进行，从而放大荧光信号，实现对靶标蛋白的灵敏定量分析。该分析方法操作简单、灵敏、普适性高，具有一定的临床应用价值。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 江苏;32 |
| 申请人： | 南京大学 |
| 发明人： | 吴洁;鞠熀先;甘海莹 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2019-03-12T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-05-31T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201910191414.X |
| 公开号： | CN109828120A |
| 分类号： | G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33 |
| 申请人地址： | 210023 江苏省南京市栖霞区仙林大道163号 |
| 主权项： | 1.本发明涉及一种基于靶标激发金纳米粒子表面DNA循环的蛋白质荧光分析方法，其特征在于该分析方法以含有修饰发卡DNA1的金纳米粒子Au-DNA1、双链DNA识别探针DNA2/DNA3、单链DNA识别探针DNA4和核酸外切酶Nt.BbvCI的溶液为检测溶液，当靶标蛋白存在时，通过蛋白-适配体识别方式，被DNA2/DNA3和DNA4夹心识别，基于邻位效应，DNA4取代DNA2与DNA3杂交，释放的DNA2与Au-DNA1杂交，激活酶切位点，引发Nt.BbvCI对DNA1的酶切，使得标记在DNA1上的荧光染料远离金纳米粒子表面恢复荧光，同时，DNA2被再次释放并引发第二轮酶切，如此循环，放大荧光信号，实现对靶标蛋白的灵敏定量分析。 2.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于所述的DNA1上标记有荧光染料，由于DNA1的发卡结构，荧光染料接近金纳米粒子表面，荧光处于猝灭状态。 3.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于所述的DNA3含有两个功能片段，分别是能特异性识别靶标蛋白的适配体片段和能与DNA2杂交的核酸片段。 4.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于所述的DNA4含有两个功能片段，分别是能特异性识别靶标蛋白的适配体片段和能邻位取代DNA2与DNA3杂交的核酸片段。 5.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于所述的DNA2能与DNA1杂交形成能被Nt.BbvCI酶切的DNA2/DNA1双链。 6.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于如下检测步骤： (1)将样品和检测溶液混合，37℃温育60分钟，用荧光光谱仪测荧光强度； (2)利用标准曲线法，求出样品中靶标蛋白的浓度。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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