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原文传递基于DNA微阵列的蛋白质化学发光成像分析方法

专利名称：	基于DNA微阵列的蛋白质化学发光成像分析方法
摘要：	本发明涉及一种基于DNA微阵列的蛋白质化学发光成像分析方法。基于不同的目标蛋白质设计其对应的捕获发卡DNA和抗体‑DNA。通过自动点样仪将不同的捕获发卡DNA分别点样到玻璃基片上，构建DNA微阵列。以针对不同目标蛋白质的抗体‑DNA的混合溶液为检测液，在目标蛋白质存在时，目标蛋白质可以被其相对应的一对抗体‑DNA同时夹心识别，使得这对抗体‑DNA上的DNA相互靠近进行邻位杂交形成复合物，进而与相对应的捕获发卡DNA杂交，打开其发卡结构。打开的捕获发卡DNA可引发生物素化发卡DNA(H1和H2)发生杂交链反应，在DNA微阵列点上生成长链DNA串联物。最后通过生物素‑亲和素特异性反应，将辣根过氧化物酶固定到DNA微阵列上，催化H2O2‑鲁米诺反应，产生化学发光信号，通过CCD扫描，实现目标蛋白质的图像分析。该蛋白质分析方法具有多组分、通量高、高灵敏、普适性好等优势，有很好的临床应用价值。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	南京大学
发明人：	吴洁;鞠熀先;肖庆
专利状态：	有效
申请日期：	2018-05-02T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-12T00:00:00+0800
申请号：	CN201810429351.2
公开号：	CN110441525A
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	210023江苏省南京市栖霞区仙林大道163号
主权项：	1.一种基于DNA微阵列的蛋白质化学发光成像分析方法，其特征在于根据不同的目标蛋白质设计其对应的捕获发卡DNA和抗体-DNA；通过自动点样仪将不同的捕获发卡DNA分别点样到玻璃基片上，构建DNA微阵列；以抗体-DNA的混合溶液为检测液，在目标蛋白质存在时，目标蛋白质可以被其相对应的一对抗体-DNA同时夹心识别形成复合物，进而与相对应的捕获发卡DNA杂交，打开其发卡结构，引发生物素化发卡H1和生物素化发卡H2发生杂交链反应，在DNA微阵列界面上生成长链DNA串联物；通过生物素-亲和素特异性反应，进一步将辣根过氧化物酶固定到DNA微阵列上，催化H2O2-鲁米诺反应，产生化学发光信号，通过CCD采集图像信号进行图像分析。 2.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于所述的DNA微阵列先通过疏水贴膜在醛基化玻片上构建4×12个传感孔，再通过自动点样仪在每个传感孔中按3×3模式点制捕获发卡DNA而制得。 3.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于所述的抗体-DNA在与其相对应的目标蛋白质夹心识别后，这对抗体-DNA上的DNA能进行邻位杂交形成复合物，并进一步与相对应的捕获发卡DNA杂交，打开其发卡结构。 4.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于所述的捕获发卡DNA被打开后释放出发卡茎部的一段序列，该序列可以引发生物素化发卡H1和生物素化发卡H2发生杂交链反应，在被打开的捕获发卡DNA上生成长链DNA串联物。 5.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于所述的抗体-DNA混合溶液与含有待测目标蛋白质的样品溶液混合后滴加到传感孔中，温育1.5小时后冲洗，随后在传感孔中依次滴加生物素化发卡H1和H2温育1.5小时、亲和素化辣根过氧化物酶温育45分钟，冲洗后，在传感孔中加入H2O2-鲁米诺溶液，通过CCD采集每个DNA微阵列点上的化学发光图像信号，最后通过标准曲线法求出样品中各种目标蛋白质的浓度。
所属类别：	发明专利