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原文传递一种重金属镉离子的荧光定量快速检测试纸条及其制备方法和应用

专利名称：	一种重金属镉离子的荧光定量快速检测试纸条及其制备方法和应用
摘要：	一种重金属镉离子的荧光定量快速检测试纸条及其制备方法和应用，属于食品检测技术领域。本发明PVC底板两端分别设有样品垫和吸水垫；在PVC底板中部设有硝酸纤维素膜检测层，在硝酸纤维素膜检测层与样品垫之间设有荧光微球标记垫；所述荧光微球标记垫一端与样品垫互相叠加，另一端与硝酸纤维素膜检测层互相叠加；所述硝酸纤维素膜检测层上依次设有质控线和检测线。本发明对重金属镉离子检测速度快，全过程只需要5min即可，可以实施大批量样品的快速检测；本发明灵敏度高，大米样本检测限为10ng/mL；本发明检测过程简单，直接上样检测，样品前处理简单，无需经过专业培训，易于推广，不需要仪器，适合现场检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	无锡迪腾敏生物科技有限公司
发明人：	朱雪芳;李少珍;刘丽强
专利状态：	有效
申请日期：	2019-03-15T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-11T00:00:00+0800
申请号：	CN201910195709.4
公开号：	CN109870435A
代理机构：	无锡市大为专利商标事务所(普通合伙)
代理人：	时旭丹;张仕婷
分类号：	G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	214125 江苏省无锡市滨湖区锦锡路99号
主权项：	1.一种重金属镉离子的荧光定量快速检测试纸条，其特征在于：包括样品垫（1）、荧光微球标记垫（2）、检测线（3）、质控线（4）、吸水垫（5）、硝酸纤维素膜检测层（6）和PVC底板（7）；所述PVC底板（7）两端分别设有样品垫（1）和吸水垫（5）；在PVC底板（7）中部设有硝酸纤维素膜检测层（6），在硝酸纤维素膜检测层（6）与样品垫（1）之间设有荧光微球标记垫（2）；所述荧光微球标记垫（2）一端与样品垫（1）互相叠加，另一端与硝酸纤维素膜检测层（6）互相叠加；所述硝酸纤维素膜检测层（6）上依次设有质控线（4）和检测线（3）。 2.权利要求1所述重金属镉离子的荧光定量快速检测试纸条的制备方法，其特征在于步骤如下：（1）荧光微球储备液的制备：取0.05M pH为8的硼酸缓冲液400μL于2mL离心管中，加入100μL-120μL荧光微球，漩涡震荡，混匀备用；（2）荧光微球镉离子标记抗体的制备：取10mg/mL的EDC溶液 20μL，室温震荡活化15min，2000rpm 10℃离心10min，弃上清，对固相物用0.5mL 0.05M pH=8 硼酸缓冲液复溶，超声分散；加入重金属镉离子抗体，使抗体终浓度为30-50μg/mL，置于250rpm摇床上2h；加入封闭液，即最终浓度为1%-2%BSA，置于摇床封闭1-2h，2000rpm离心10min，弃上清，固相物用0.5mL硼酸缓冲液复溶，洗涤离心后，再用偶联储存缓冲溶液复溶，超声分散后得到荧光标记的重金属镉离子抗体，4℃保存；（3）荧光微球标记垫的制备：将步骤（2）制备所得0.2mg/mL标记荧光的重金属镉离子抗体均匀喷在玻璃纤维膜上，喷液量0.5-1μL/cm，37℃烘干过夜，得荧光微球标记垫，封袋备用；（4）包被膜的制备：将稀释好的0.2mg/mL的重金属镉离子抗原均匀喷在硝酸纤维素膜检测层上，得到检测线；将稀释好的羊抗鼠IgG均匀喷在硝酸纤维素膜检测层上，得到质控线，37℃烘干过夜，封袋备用；（5）组合：将PVC底板（7）、样品垫（1）、荧光微球标记垫（2）、涂有检测线（3）和质控线（4）的硝酸纤维素膜检测层（6）和吸水垫（5）组合，即得产品重金属镉离子的荧光定量快速检测试纸条。 3.根据权利要求2所述重金属镉离子的荧光定量快速检测试纸条的制备方法，其特征在于：所述重金属镉离子抗体是由高分泌特异抗体的单克隆杂交瘤细胞株F号分泌所得。 4.权利要求3所述一株高分泌特异抗体的单克隆杂交瘤细胞株F号，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，分类命名为单克隆细胞株，保藏编号为CGMCCNo.17306，保藏日期为2018年5月24日。 5.根据权利要求4所述单克隆杂交瘤细胞株F号，其特征在于：将其进行扩大培养，注射细胞进小鼠体内诱生腹水；取1mL腹水，加入相当于腹水体积1mL的醋酸钠缓冲液，于室温搅拌下逐滴加入辛酸33.3μL，震荡30min，8000rpm离心5min，得到上清液；加入饱和硫酸铵1mL，静置1-2h；8000rpm离心5min，弃上清液，将沉淀溶于PBS溶液中进行透析3天，得到抗镉离子单克隆抗体。 6.权利要求1所述重金属镉离子的荧光定量快速检测试纸条的应用，其特征在于：将其应用于食品中重金属镉离子的快速检测。
所属类别：	发明专利