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原文传递一种定量检测重金属镉系统及其制备方法

专利名称：	一种定量检测重金属镉系统及其制备方法
摘要：	本发明提供一种定量检测重金属镉系统，所述系统包括扣卡、荧光免疫层析试纸条和样品稀释缓冲液，扣卡为荧光免疫层析试纸条的外部壳结构，设有加样孔和观察窗；荧光免疫层析试纸条包括样品垫、标记垫、层析膜、吸水垫和底板；标记垫上同时固定有荧光染料修饰的重金属镉特异性抗体和荧光染料修饰的质控分子；定量检测线上固定有重金属镉螯合剂半抗原，半抗原与固定在标记垫上的荧光染料修饰重金属镉特异性抗体特异性结合；以及所述质控线上固定有能与质控分子特异性结合的生物分子；和待检测样品在检测之前，用所述样品稀释缓冲液处理。为了能够检测样品中的重金属镉，待检测样品在检测之前，用所述样品稀释缓冲液处理，所述样品稀释包括有与重金属镉结合形成重金属镉螯合剂半抗原的螯合剂；如果不使用本发明的样品稀释缓冲液处理样品，将样品直接进行检测，样品中的重金属镉则不能够被检测，本发明的样品稀释缓冲液存在对于实现样品镉的检测至关重要。
专利类型：	发明专利
申请人：	北京大弘生物技术有限公司
发明人：	李道峰;潘文东
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T12:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
申请号：	CN202010091718.1
公开号：	CN111198264A
代理机构：	北京汉鼎理利专利代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：	潘满根
分类号：	G01N33/533;G01N33/558;G01N33/577;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/533;G01N33/558;G01N33/577
申请人地址：	101400 北京市怀柔区雁栖经济开发区乐园大街11号1幢三层
主权项：	1.一种定量检测重金属镉系统，其特征在于，所述系统包括扣卡、荧光免疫层析试纸条和样品稀释缓冲液；所述扣卡为荧光免疫层析试纸条的外部壳结构，设有加样孔和观察窗；所述荧光免疫层析试纸条包括样品垫、标记垫、层析膜、吸水垫和底板，所述样品垫、标记垫、层析膜和吸水垫搭载于底板之上，所述样品垫位于所述加样孔的下方，且连接于所述标记垫，标记垫连接于所述层析膜，所述层析膜连接于吸水垫，所述层析膜上固定有一条定量检测线和一条质控线，所述检测线和质控线位于所述观察窗的下方；所述标记垫上同时固定有荧光染料修饰的重金属镉特异性抗体和荧光染料修饰的质控分子，修饰重金属镉特异性抗体的荧光染料的发射波长与修饰质控分子的荧光染料的发射波长相同，波长范围为300-1300nm；所述定量检测线上固定有重金属镉螯合剂半抗原，所述半抗原与固定在标记垫上的荧光染料修饰重金属镉特异性抗体特异性结合；以及所述质控线上固定有能与质控分子特异性结合的生物分子；和待检测样品在检测之前，用所述样品稀释缓冲液处理，所述样品稀释包括有与重金属镉结合形成重金属镉螯合剂半抗原的螯合剂。 2.根据权利要求1所述的定量检测重金属镉系统，其特征在于，所述荧光免疫层析试纸条还包括颗粒物分离膜，其设置在所述标记垫和所述层析膜之间，此时标记垫连接于颗粒物分离膜，颗粒物分离膜连接于层析膜；或者设置在样品垫和标记垫之间，此时样品垫连接于颗粒物分离膜，颗粒物分离膜连接于标记垫；或者直接与样品垫合并为同一结构。 3.根据权利要求1所述的定量检测重金属镉系统，其特征在于，所述荧光染料为有机荧光染料或稀土元素荧光微球染料，发射波长为550-800nm，优选665nm。 4.根据权利要求1所述的定量检测重金属镉系统，其特征在于，所述层析膜、底板和扣卡在大于550nm时荧光很弱或不含有荧光剂，优选底板为白色，表面附有不干胶，且两者均不含荧光剂。 5.根据权利要求1所述的定量检测重金属镉系统，其特征在于，所述样品稀释缓冲液包含牛血清白蛋白、蔗糖、表面活性剂、HEPES和螯合剂，pH值为7.0-8.0，其中，牛血清白蛋白的浓度为0.05～2％，蔗糖的浓度为1～15％，表面活性剂的浓度为0.05～2％，螯合剂EDTA浓度为0.01～0.4M，优选地，pH值为7.5，缓冲系统为20mM的HEPES，牛血清白蛋白浓度为1％、蔗糖浓度为5％、EDTA浓度为0.1M和表面活性剂曲拉通X-100浓度为0.8％。 6.一种制备权利要求1-5任一所述的定量检测重金属镉系统的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：步骤1：用化学交联或生物分子间特异性作用分别将荧光染料偶联到重金属镉特异性抗体和质控分子的表面，分别得到荧光染料修饰的重金属镉特异性抗体和荧光染料修饰的质控分子；步骤2：将步骤1得到的荧光染料修饰的重金属镉特异性抗体和荧光染料修饰的质控分子均固定到标记垫上；步骤3：在所述层析膜上分别设置一条定量检测线和一条质控线，其中，质控线上固定有能与质控分子特异性结合的生物分子，定量检测线上固定有重金属镉螯合剂抗原，且该抗原决与固定在标记垫上的荧光染料修饰的重金属镉(Cd)特异性抗体竞争性结合；步骤4：将样品垫、标记垫、层析膜、吸水垫和底板构建成荧光免疫层析试纸条；步骤5：将荧光免疫层析试纸条装卡；和步骤6：将样品稀释缓冲液处理待测样品，所述样品稀释包括有与重金属镉结合形成重金属镉螯合剂半抗原的螯合剂。 7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，还包括设置颗粒物分离膜的步骤，所述颗粒物分离膜设置在标记垫和层析膜之间，此时所述标记垫连接于颗粒物分离膜，颗粒物分离膜连接于层析膜；或者设置在样品垫和标记垫之间，此时样品垫连接于颗粒物分离膜，颗粒物分离膜连接于标记垫；或者直接与样品垫合并为同一结构。 8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述荧光染料为有机荧光染料或稀土元素微球荧光染料，发射波长为550-800nm，优选665nm。 9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述层析膜、底板和扣卡在大于550nm时荧光很弱或不含有荧光剂，优选底板为白色，表面附有不干胶，且两者均不含荧光剂。 10.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述样品稀释缓冲液包含牛血清白蛋白、蔗糖和表面活性剂，pH值为7.0-8.0，其中，牛血清白蛋白的浓度为0.05～2％，蔗糖的浓度为1～15％，表面活性剂的浓度为0.05～2％，螯合剂EDTA浓度为0.01～0.5M；优选地，pH值为7.5，缓冲系统为20mM的HEPES，牛血清白蛋白浓度为1％、蔗糖浓度为5％、EDTA浓度为0.1M和表面活性剂曲拉通X-100浓度为0.8％。
所属类别：	发明专利