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用液相色谱法分离测定多肽及其中杂肽的方法
| 专利名称： | 用液相色谱法分离测定多肽及其中杂肽的方法 |
| 摘要： | 本发明涉及到用液相色谱法分离测定多肽及其中杂肽的方法,对多肽溶液进行分离测定，液相色谱法所用的色谱柱中，固定相为烷基键合硅胶，流动相为乙腈‑磷酸盐溶液，本发明采用磷酸盐溶液为流动相A，乙腈为流动相B，采用乙腈进行浓度梯度洗脱，可以分离分析出三氟乙酸分析体系检测不到的杂肽，可以更好的控制多肽原料药的质量。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 江苏;32 |
| 申请人： | 蒋贤龙 |
| 发明人： | 蒋贤龙 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2017-12-01T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-06-11T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201711251509.3 |
| 公开号： | CN109870525A |
| 分类号： | G01N30/06(2006.01);G;G01;G01N;G01N30 |
| 申请人地址： | 221700 江苏省徐州市丰县首羡镇政府家属院 |
| 主权项： | 1.一种用液相色谱法多肽中杂肽的方法，其特征在于：液相色谱法所用的色谱柱中，固定相为烷基键合硅胶，流动相为乙腈-磷酸盐溶液，其中，以磷酸盐溶液或含有适量乙腈的磷酸盐溶液为流动相A，磷酸盐溶液的浓度为0.01～0.1mol/L；以乙腈或含有适量磷酸盐溶液的乙腈为流动相B，采用乙腈进行梯度洗脱，且按体积比计流动相B占整个流动相的浓度梯度范围为10～90%；所述的多肽溶液的浓度为1ml溶液/0.1～5mg多肽。 2.根据权利要求1所述的用液相色谱法分离测定多肽及其中杂肽的方法，其特征在于：所述的固定相烷基键合硅胶为十八烷基键合硅胶、十二烷基键合硅胶、辛烷键合硅胶中的一种。 3.根据权利要求2所述的用液相色谱法分离测定多肽及其中杂肽的方法，其特征在于：所述的烷基键合硅胶为末端封尾的十八烷基键合硅胶。 4.根据权利要求1所述的用液相色谱法分离测定多肽及其中杂肽的方法，其特征在于：所述流动相A中，磷酸盐溶液为磷酸钾盐溶液、磷酸钠盐溶液、磷酸铵盐溶液中的一种。 5.根据权利要求4所述的用液相色谱法分离测定多肽及其中杂肽的方法，其特征在于：所述的磷酸盐溶液为磷酸二氢钾溶液，以磷酸二氢钾用水配制配成0.05mol/L，用8～12%氢氧化钠溶液调节pH值为4.8～5.2。 6.根据权利要求1所述的用液相色谱法分离测定多肽及其中杂肽的方法，其特征在于：所述流动相B的浓度梯度范围为25～60%。 7.根据权利要求6所述的用液相色谱法分离测定多肽及其中杂肽的方法，其特征在于：所述流动相B的浓度梯度为：0min时为25%，50min时为50%，70min时为60%。 8.根据权利要求1所述的用液相色谱法分离测定多肽及其中杂肽的方法，其特征在于：所述流动相的流速为0.5～1.5ml/min，检测波长为200～230nm，色谱柱柱温为20～60℃，取多肽溶液2～100μl注入高效液相色谱仪，进行多肽及其中杂肽的分离和测定。 9.根据权利要求8所述的用液相色谱法分离测定多肽及其中杂肽的方法，其特征在于：所述的流动相的速度为1ml/min，检测波长为215nm，色谱柱柱温为40℃。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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