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原文传递一种均相酶免疫偶联物及其制备方法和应用

专利名称：	一种均相酶免疫偶联物及其制备方法和应用
摘要：	本发明涉及均相酶免疫检测技术领域，尤其涉及一种小分子半抗原与酶在偶联剂的作用下脱水得到的偶联产物。首先将小分子半抗原溶解于磷酸盐缓冲液中；然后向上述小分子半抗原溶液中加入偶联剂、酶以及蛋白质反应得到均相酶免疫偶联物。本发明克服了现有技术中通过均相酶免疫法测定血清中特定抗原抗体的过程中使用的酶偶联物容易受到个体健康状况影响，导致测试结果可靠性不足以及偶联效率较低的缺陷，本发明具有降低个体健康状况对测试的干扰，提高测试结果可靠性；酶以及蛋白质与小分子半抗原在偶联剂的作用下直接结合，无需其它桥连分子，偶联效率高且反应条件温和；所制得的酶偶联物水溶性好，酶活力损失较小等优点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	浙江;33
申请人：	杭州博谱医药科技有限公司
发明人：	王轶雄;杨晓东;缪刘;曹静
专利状态：	有效
申请日期：	2019-03-20T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-14T00:00:00+0800
申请号：	CN201910214084.1
公开号：	CN109884318A
代理机构：	杭州杭诚专利事务所有限公司
代理人：	尉伟敏
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	311121 浙江省杭州市余杭区仓前街道龙潭路8号1幢105室
主权项：	1.一种均相酶免疫偶联物，其特征在于，所述的均相酶免疫偶联物为小分子半抗原与酶及蛋白质在偶联剂的作用下脱水得到的偶联产物。 2.根据权利要求1所述的一种均相酶免疫偶联物，其特征在于，所述的小分子半抗原为甘胆酸或3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸中的一种；所述的酶为苹果酸脱氢酶或者甲酸脱氢酶中的一种；所述的蛋白质为牛血清白蛋白、卵白蛋白、血蓝蛋白、卵清蛋白或多聚赖氨酸中的一种；所述的偶联剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐或二环己基碳二亚胺中的一种或两种组合物。 3.一种如权利要求1~2中所述的均相酶免疫偶联物的制备方法，其特征在于，所述的制备方法具体步骤如下：（S.1）将小分子半抗原溶解于磷酸盐缓冲液中，得到小分子半抗原溶液；（S.2）向上述小分子半抗原溶液中加入酶以及蛋白质，搅拌混合后再加入偶联剂，继续搅拌反应得到反应液；（S.3）将反应得到的反应液进行透析纯化，得到均相酶免疫偶联物。 4.根据权利要求3所述的一种均相酶免疫偶联物的制备方法，其特征在于，所述的步骤（S.1）中的磷酸盐缓冲液的pH值为6~8，所述的磷酸盐缓冲液中还添加有一定的有机溶剂，所述的有机溶剂为甲醇、二甲亚砜或者N, N-二甲基甲酰胺中的一种。 5.根据权利要求3所述的一种均相酶免疫偶联物的制备方法，其特征在于，所述的步骤（S.2）中蛋白质的质量与小分子半抗原的质量之比为（0.5~2）: 20。 6.根据权利要求3或5所述的一种均相酶免疫偶联物的制备方法，其特征在于，所述的步骤（S.2）中小分子半抗原与酶的质量之比为20：（1~6），小分子半抗原与偶联体系之间的质量比为1：（0.8~2）。 7.根据权利要求6所述的一种均相酶免疫偶联物的制备方法，其特征在于，所述的步骤（S.2）中搅拌混合时间为10~30min，搅拌反应条件为避光2~8℃或室温反应2~8h。 8.根据权利要求3一种均相酶免疫偶联物的制备方法，其特征在于，所述的步骤（S.3）中透析袋的通透分子大小<14KD，透析温度为4℃，6小时换液1次，连续6-8次。 9.一种如权利要求1~2中所述的均相酶免疫偶联物在均相酶免疫检测试剂体系中应用。
所属类别：	发明专利