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原文传递一种蜂蜜中黄酮类成分的含量测定方法

专利名称：	一种蜂蜜中黄酮类成分的含量测定方法
摘要：	本发明为一种蜂蜜中黄酮类成分的含量测定方法，提供一种蜂蜜中黄酮类成分的提取分析方法，所述黄酮类成分为槲皮素、山奈酚、异鼠李素的一种或两种以上的混合，所述方法包括为：取蜂蜜样品与纯水混合后，用超声萃取仪萃取，得到的混合溶液经离心后，取上清液作为蜂蜜提取液；将蜂蜜提取液与含吸附剂的分散溶液涡旋混合后，经固相萃取仪弃去滤液，取下含吸附剂的有机滤膜，用洗脱溶剂洗脱，收集滤液，离心取上清液装入液相小瓶，用高效液相色谱仪对分析物进行检测分析。本发明是采用蟹壳粉作为吸附剂，结合分散微固相萃取技术和高效液相色谱技术，来富集并检测食品蜂蜜中黄酮类成分含量的新方法。相比于传统方法，本发明具有更高的灵敏度，且省时、简便、环保，提取过程中消耗极少的有机试剂，实验人员在操作验过程中更安全。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	浙江;33
申请人：	浙江工业大学
发明人：	楚楚;王珊;江璐依;唐谊平;颜继忠
专利状态：	有效
申请日期：	2019-02-02T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-14T00:00:00+0800
申请号：	CN201910108126.3
公开号：	CN109884199A
代理机构：	杭州天正专利事务所有限公司
代理人：	黄美娟;王兵
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	310014 浙江省杭州市下城区潮王路18号浙江工业大学科技处
主权项：	1.一种蜂蜜中黄酮类成分的含量测定方法，所述黄酮类成分为槲皮素、山奈酚或异鼠李素的一种或两种以上的混合，其特征在于：所述方法包括以下步骤： (1)制备蜂蜜提取液：将蜂蜜样品溶于纯水中得到浓度为0.1-1.0g/mL的蜂蜜水溶液，将所述的蜂蜜水溶液超声10-40min后，然后在4000-13000rpm条件下离心5-15min取上清液，然后将所述的上清液用孔径为0.22μm的滤膜过滤，取滤液即为蜂蜜提取液； (2)配制十二烷基硫酸钠-吸附剂分散液：将十二烷基硫酸钠与吸附剂混合，加入纯水至十二烷基硫酸钠终浓度为10-25mM，超声2-15min混合均匀，配制得到吸附剂浓度为0.05-0.40mg/mL的吸附剂分散液；所述吸附剂为蟹壳粉；所述的十二烷基硫酸钠与吸附剂的质量比为50：1； (3)向步骤(1)所述蜂蜜提取液中加入步骤(2)所述的吸附剂分散液，加水稀释，配成吸附剂浓度为1-8μg/mL混合溶液，并调节溶液pH至3-11，然后将所述的混合溶液涡旋1～8min，过滤，所得固体用洗脱剂洗脱，收集洗脱液，即为富集样液，4000-13000rpm离心5-20min后，取上清液用高效液相色谱进行采样分析，得到富集样液中黄酮类成分的提取色谱图；所述洗脱剂为乙腈、甲醇、乙醇或丙酮；所述的高效液相色谱分析的条件为：色谱柱：ZORBAX SB-C18色谱柱(5μm,4.6×250mm)，进样量：10μL，柱温：35℃，流速1mL/min，流动相：体积比为55:45的甲醇和体积分数为0.4％的磷酸水的混合液，等度洗脱12min； (4)将步骤(3)所得富集样液的各成分的色谱图中色谱峰的峰面积值分别代入槲皮素、山奈酚和异鼠李素的标准曲线，计算得到蜂蜜中槲皮素、山奈酚、异鼠李素的含量。 2.如权利要求1所述方法，其特征在于：步骤(2)中，所述吸附剂为蟹壳粉。 3.如权利要求2所述方法，其特征在于：所述蟹壳粉按以下方法制备：蟹壳用纯净水洗涤后，置于60～70℃的烘箱中干燥至恒重；然后将干燥好的蟹壳粉碎成粉末并过100目筛，然后将过筛后的蟹壳粉末在100℃下，用质量分数为20％的氢氧化钠水溶液处理1小时，然后用纯净水洗涤后，置于60～70℃的烘箱中干燥12小时，将干燥后的蟹壳粉末再次粉碎并过200目筛，即得作为吸附剂的蟹壳粉末。 4.如权利要求1所述方法，其特征在于：所述的槲皮素、山奈酚和异鼠李素的标准曲线按照如下方法进行制备： a、以甲醇为溶剂，以槲皮素为对照品配制浓度范围为0.27-104ng/mL的槲皮素对照品溶液，按照步骤(3)中所述富集样液的同样条件用高效液相色谱进行检测，获得槲皮素对照品的色谱图，以所述的槲皮素对照品溶液的色谱图中色谱峰的峰面积为纵坐标，以槲皮素对照品的浓度为横坐标，制作槲皮素对照品标准曲线； b、将步骤a的对照品槲皮素分别换成山奈酚和异鼠李素，按步骤a所述的方法分别制作山奈酚对照品标准曲线以及异鼠李素对照品标准曲线。 5.如权利要求1所述方法，其特征在于：步骤(3)中，所述吸附剂浓度为：1μg/mL、2μg/mL、4μg/mL、6μg/mL或8μg/mL。 6.如权利要求1所述方法，其特征在于：所述的pH通过1M甲酸或1M氢氧化钠进行调节。 7.如权利要求1所述方法，其特征在于：步骤(3)中，所述涡旋时间为：1min、2min、4min、6min或8min。 8.如权利要求1所述方法，其特征在于：步骤(3)中，所述pH为：3、5、7、9或11。 9.如权利要求1所述方法，其特征在于：步骤(3)中，所述洗脱剂为甲醇。 10.如权利要求1所述方法，其特征在于：步骤(3)中，所述洗脱剂体积为80μL、100μL、150μL或200μL。
所属类别：	发明专利