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原文传递一种基于质谱技术的血液免疫抑制药物浓度定量检测方法

专利名称：	一种基于质谱技术的血液免疫抑制药物浓度定量检测方法
摘要：	本发明公开了一种基于质谱技术的血液免疫抑制药物浓度定量检测方法，涉及分析化学技术领域，包括以下步骤：配制包含待测免疫抑制药物的标准品工作液和同位素内标品工作液的混合工作液；取不同浓度梯度的所述混合工作液，加入全血标本和甲醇后混匀，超声提取后离心取上清液；将所述上清液用高效液相色谱串联三重四级杆质谱检测，获得标准品峰面积和各自内标品峰面积；以标准品工作液的浓度为横坐标，标准品峰面积和各自内标品峰面积的面积比为纵坐标绘制标准曲线；取待测全血标本，加入所述同位素内标品工作液按同样的方法取上清液并计算峰面积比代入标准曲线，对应的横坐标即为待测免疫抑制药物的浓度。本发明实现了对免疫抑制药物的精确检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	浙江;33
申请人：	杭州同创医学检验实验室有限公司
发明人：	王雅梅;张怀磊;许亚丽;屠明敏;康宏厚
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-08T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-14T00:00:00+0800
申请号：	CN201910276136.8
公开号：	CN109884234A
代理机构：	杭州信义达专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	施建勇
分类号：	G01N30/88(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	310000 浙江省杭州市下城区华中南路672号3幢501室
主权项：	1.一种基于质谱技术的血液免疫抑制药物浓度定量检测方法，其特征在于，包括以下步骤： S1：配制混合工作液，配制包含待测免疫抑制药物的标准品工作液和同位素内标品工作液的混合工作液； S2：制备上清液，取不同浓度梯度的所述混合工作液，加入全血标本和甲醇后混匀，超声提取后离心取上清液； S3：获取峰面积，将所述上清液用高效液相色谱串联三重四级杆质谱检测，获得标准品峰面积和各自内标品峰面积； S4：绘制标准曲线，以标准品工作液的浓度为横坐标，标准品峰面积和各自内标品峰面积的面积比为纵坐标绘制标准曲线； S5：计算浓度，取待测全血标本，加入所述同位素内标品工作液和甲醇后混匀，超声提取后离心取上清液按照步骤S3获取待测免疫抑制药物的峰面积与内标品峰面积，将两者的峰面积比代入标准曲线，对应的横坐标即为待测免疫抑制药物的浓度。 2.根据权利要求1所述的基于质谱技术的血液免疫抑制药物浓度定量检测方法，其特征在于，所述S1中，标准品工作液为含有CsA、FK506、RPM和MPA的混合储备液，浓度分别为15、0.3、0.3、150μg/mL；同位素内标品工作液为5.4.2含有CsA-d4、FK-506-d2、RPM-d3和MPA-d3的混合储备液，浓度分别为4、0.4、0.6、10μg/mL；以不同体积的标准品工作液、相同体积的内标品工作液、定容液配置不同浓度梯度的所述混合工作液。 3.根据权利要求1所述的基于质谱技术的血液免疫抑制药物浓度定量检测方法，其特征在于，所述S3中色谱条件如下：色谱柱为C18色谱柱，流动相A为10mmol/L的乙酸铵溶液，流动相B为甲醇，进样量为10μL，柱温为40℃，样品室温度：10℃，流速为0.3mL/min。 4.根据权利要求1所述的基于质谱技术的血液免疫抑制药物浓度定量检测方法，其特征在于，所述S3中质谱条件如下：离子源模式为ESI+模式，毛细管电压为3.5kV，离子源温度：150℃，脱溶剂温度为350℃，脱溶剂气流量为800L/min，锥孔反吹气流量为50L/h。 5.根据权利要求1所述的基于质谱技术的血液免疫抑制药物浓度定量检测方法，其特征在于，所述标准曲线由Masslynx软件自带定量软件Targetlynx绘制。 6.根据权利要求1所述的基于质谱技术的血液免疫抑制药物浓度定量检测方法，其特征在于，所述S2中超声提取的时间为10min。 7.根据权利要求1所述的基于质谱技术的血液免疫抑制药物浓度定量检测方法，其特征在于，所述S2中离心的具体操作为：在5000g离心力下离心10min。
所属类别：	发明专利