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原文传递一种同时检测血液中6种免疫抑制剂浓度的方法

专利名称：	一种同时检测血液中6种免疫抑制剂浓度的方法
摘要：	本发明涉及一种同时检测血液中6种免疫抑制剂浓度的方法，所述方法包括：(1)配制标准溶液，并利用液相色谱‑质谱对所述标准溶液进行检测、建立标准曲线；其中，所述6种免疫抑制剂为硫唑嘌呤、6‑巯基嘌呤、6‑甲基巯基嘌呤、6‑硫鸟嘌呤、6‑硫鸟嘌呤核苷和咪唑立宾；(2)将待处理血样、内标工作液和蛋白沉淀剂混合并取清液进行稀释，得到待进样样品；(3)利用液相色谱‑质谱对所述待进样样品进行检测，根据检测结果和所述标准曲线确定所述待处理血样中6种免疫抑制剂的含量。本发明提供的检测方法能够一针测得6种免疫抑制剂的含量，检测时间短，在5min以内出结果，提高检测效率的同时降低操作难度，适用于高通量样本的检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	苏州和合医学检验有限公司
发明人：	张杰;贾永娟;刘春冉;刘杏立;倪君君
专利状态：	有效
申请日期：	2023-07-14T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-17T00:00:00+0800
申请号：	CN202310869067.8
公开号：	CN117074582A
代理机构：	北京开阳星知识产权代理有限公司
代理人：	吕亚会
分类号：	G01N30/06;G01N30/14;G01N30/34;G01N30/72;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/34;G01N30/72
申请人地址：	215300 江苏省苏州市昆山市玉山镇元丰路168号3号房
主权项：	1.一种同时检测血液中6种免疫抑制剂浓度的方法，其特征在于，所述方法包括： (1)配制至少三种不同浓度的含有6种免疫抑制剂及其内标物的标准溶液，并利用液相色谱-质谱对所述标准溶液进行检测，根据检测结果分别建立所述6种免疫抑制剂的标准曲线；其中，所述6种免疫抑制剂为硫唑嘌呤、6-巯基嘌呤、6-甲基巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、6-硫鸟嘌呤核苷和咪唑立宾； (2)将待处理血样、内标工作液和蛋白沉淀剂混合并取清液进行稀释，得到待进样样品； (3)利用液相色谱-质谱对所述待进样样品进行检测，根据检测结果和所述标准曲线确定所述待处理血样中6种免疫抑制剂的含量。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述蛋白沉淀剂选自甲醇和/或乙腈；和/或，所述待处理血样与所述蛋白沉淀剂的体积比为1:(5-10)；和/或，所述待处理血样和所述内标工作液的体积比为(5-10):1；和/或，所述稀释使用的溶剂为纯水。 3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述清液与纯水的体积比为1:(1-5)。 4.根据权利要求1-3中的任一项所述的方法，其特征在于，所述液相色谱的条件包括：流动相：A相为含有0.2-3％甲酸、1-10mmol/L甲酸铵或乙酸铵的水溶液，B相为甲醇或乙腈；梯度洗脱： 0.00min：A相85-98％，B相15-2％； 0.50min：A相85-98％，B相15-2％； 0.60min：A相50-75％，B相50-25％； 1.20min：A相50-75％，B相50-25％； 1.50min：A相25-45％，B相75-55％； 2.00min：A相25-45％，B相75-55％； 2.50min：A相2-20％，B相98-80％； 3.00min：A相2-20％，B相98-80％； 3.10min：A相85-98％，B相15-2％； 5.00min：A相85-98％，B相15-2％；和/或，柱温为35-40℃；和/或，所述流动相的流速为0.3-0.5mL/min。 5.根据权利要求1-4中的任一项所述的方法，其特征在于，所述液相色谱的条件包括：使用的分析色谱柱为Agilent Poroshell 120EC-C18、phenomenex Kinetex、Waterscortecs T3、岛津Shim-pack veiox C18。 6.根据权利要求1-5中的任一项所述的方法，其特征在于，所述质谱的条件包括：离子源温度：450-500℃；离子源高压：4500-5000V；气帘气：12-20L/min；碰撞气：7-10L/min；干燥气1：30-80L/min；干燥气2：30-80L/min。 7.根据权利要求1-6中的任一项所述的方法，其特征在于，所述6种免疫抑制剂的内标物分别为硫唑嘌呤-d3、6-甲基巯基嘌呤-d3、6-巯基嘌呤-13C,15N2。 8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其特征在于，所述标准溶液的制备方法包括：制备至少三个级别浓度的标准工作液，标准工作液、内标工作液和蛋白沉淀剂混合，取上清液进行稀释，得到所述标准溶液。 9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，各所述级别浓度的标准工作液均利用稀释剂由标准品母液稀释得到，所述标准品母液是利用溶剂分别溶解所述6种免疫抑制剂各自的标准品得到；所述内标工作液利用稀释剂由内标母液稀释得到，所述内标母液是利用溶剂分别溶解所述6种免疫抑制剂各自的内标物标准品得到。 10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述稀释剂为甲醇水溶液，所述甲醇水溶液的浓度为60-80％。