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原文传递一种HPLCMS-MS联用检测人血浆中喹硫平的方法

专利名称：	一种HPLCMS-MS联用检测人血浆中喹硫平的方法
摘要：	本发明属于生物分析领域，具体涉及一种HPLCMS‑MS联用检测人血浆中喹硫平的方法。本发明的检测方法包括以下步骤：(1)人血浆样品前处理；(2)液相色谱‑质谱联用检测，采用流动相A和流动相B为混合流动相进行梯度洗脱，其中：流动相A为乙腈‑水，流动相B为乙酸铵‑水；(3)人血浆中喹硫平浓度的测定。本发明以氘代富马酸喹硫平为内标物，采用InertSustain C18柱进行梯度洗脱，氘代内标和待测物具有相同的保留时间、化学性质和基质效应，测定血浆中富马酸喹硫平浓度的重现性、准确度均较好。本发明方法可用于评价喹硫平各剂型的生物等效性。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	南京海纳医药科技股份有限公司
发明人：	高倩倩;潘诗苑;王华娟
专利状态：	有效
申请日期：	2019-02-22T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-18T00:00:00+0800
申请号：	CN201910132157.2
公开号：	CN109900820A
代理机构：	南京思拓知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	吕鹏涛
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	210009 江苏省南京市鼓楼区新模范马路5号15层
主权项：	1.一种HPLCMS-MS联用检测人血浆中喹硫平的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)人血浆样品前处理；(2)液相色谱-质谱联用检测，采用流动相A和流动相B为混合流动相进行梯度洗脱，所述流动相A为乙腈-水，所述流动相B为乙酸铵水溶液；(3)人血浆中喹硫平浓度的测定。 2.根据权利要求1所述的HPLCMS-MS联用检测人血浆中喹硫平的方法，其特征在于，所述梯度洗脱过程如下：在0-0.8分钟内，流动相A和流动相B的体积比为36:64；在0.8-1.3分钟内，流动相A和流动相B的体积比由36:64匀速渐变至80:20；在1.3-2.9分钟内，流动相A和流动相B的体积比为80:20；在2.9-2.91分钟内，流动相A和流动相B的体积比由80:20匀速渐变至100:0；在2.91-3.5分钟内，流动相A和流动相B的体积比为100:0；在3.5-3.6分钟内，流动相A和流动相B的体积比由100:0匀速渐变至36:64；在3.6-5.5分钟内，流动相A和流动相B的体积比为36:64。 3.根据权利要求1或2所述的HPLCMS-MS联用检测人血浆中喹硫平的方法，其特征在于，所述流动相A中乙腈-水的体积比为95:5；所述流动相B为2mM乙酸铵水溶液；优选，在流动相A中，以乙腈-水的总体积为100％为基准，含有体积比为0.10～0.20％乙酸；更优选，在流动相A中，以乙腈-水的总体积为100％为基准，含有体积比为0.15％乙酸；优选，在流动相B中，以乙酸铵水溶液的总体积为100％为基准，含有体积比为0.10～0.20％乙酸；更优选，在流动相B中，以乙酸铵水溶液的总体积为100％为基准，含有体积比为0.15％乙酸。 4.根据权利要求1或2所述的HPLCMS-MS联用检测人血浆中喹硫平的方法，其特征在于，色谱条件包括：采用InertSustain C18作为色谱柱；优选该色谱柱的长度为150mm，直径为3.0mm，填料粒径为3.0μm；柱温30～45℃，优选40℃；流速0.1～1.0mL/min，优选0.5mL/min；质谱条件包括：采用电喷雾离子源，正离子多反应监测扫描，喷雾电压1500V，离子源温度550℃；喹硫平，[M+H]+，m/z 384.4→253.2，DP值61V，CE值31V；富马酸喹硫平-d8，[M+H]+，m/z 392.4→258.1，DP值69V，CE值33V。 5.根据权利要求1所述的HPLCMS-MS联用检测人血浆中喹硫平的方法，其特征在于，在步骤(1)中，人血浆样品通过蛋白沉淀法进行前处理；采用富马酸喹硫平-d8作为内标，采用乙腈作为沉淀剂。 6.根据权利要求1所述的HPLCMS-MS联用检测人血浆中喹硫平的方法，其特征在于，包括内标溶液的配制：称取富马酸喹硫平-d8对照品，用纯甲醇溶解得到浓度为1.00mg/ml富马酸喹硫平-d8储备液，再用体积比为50:50的甲醇与水混合溶液稀释得到浓度为100ng/mL的富马酸喹硫平-d8工作液。 7.根据权利要求5所述的HPLCMS-MS联用检测人血浆中喹硫平的方法，其特征在于，在步骤(1)中，人血浆样品前处理包括：人血浆样品加入内标和沉淀剂，涡旋及离心后取上清液，与稀释剂混合，即得待测样品；所述稀释剂为乙腈和水的混合溶液，乙腈和水的体积比为50:50。 8.根据权利要求6所述的HPLCMS-MS联用检测人血浆中喹硫平的方法，其特征在于，在步骤(1)中，人血浆样品前处理包括：取60μL人血浆样品，加入60μL内标工作液和480μL乙腈，涡旋及离心后取上清液，再与400μL稀释剂混合后，即得待测样品。 9.根据权利要求7或8所述的HPLCMS-MS联用检测人血浆中喹硫平的方法，其特征在于，所述涡旋及离心的条件为：涡旋10min，在4℃条件下以4000rpm/min速度离心10min；将待测样品置于自动进样器，进行LC-MS/MS分析，进样体积为2μL，进样器温度5℃。 10.根据权利要求1所述的HPLCMS-MS联用检测人血浆中喹硫平的方法，其特征在于，该方法可用于临床药代动力学样本监测。
所属类别：	发明专利