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原文传递一种基于肽段C末端选择性酶标记的质谱从头测序方法

专利名称：	一种基于肽段C末端选择性酶标记的质谱从头测序方法
摘要：	本发明涉及一种基于肽段C末端选择性酶标记的质谱从头测序方法及其应用。所述的方法是在肽段C末端酰胺酶的催化作用下，肽段C末端的羧基直接通过酰胺化反应标记上带碱性基团的小分子或者先通过酰胺化反应标记上带氨基的不饱和烃类，进一步通过叠氮‑炔基或者巯基‑烯的点击化学反应连接上碱性功能分子。肽段C末端标记上的碱性分子增加二级质谱中y离子的数目，提高肽段在质谱中的响应和碎裂效率，从而实现肽段测序。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	辽宁;21
申请人：	中国科学院大连化学物理研究所
发明人：	张丽华;吴琼;单亦初;杨超;杨开广;张玉奎
专利状态：	有效
申请日期：	2017-12-07T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-18T00:00:00+0800
申请号：	CN201711282055.6
公开号：	CN109900834A
代理机构：	沈阳科苑专利商标代理有限公司
代理人：	马驰
分类号：	G01N30/06(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	116023 辽宁省大连市中山路457号
主权项：	1.一种基于肽段C末端选择性酶标记的质谱从头测序方法，其特征在于：在有机相中，肽段C末端的羧基在肽段C末端酰胺酶的催化作用下，直接通过酰胺化反应标记上带碱性基团的小分子；或，先通过酰胺化反应标记上带氨基的不饱和烃类，后通过叠氮-炔基或者巯基-烯的点击化学反应连接上碱性功能分子；肽段C末端标记上的碱性分子增加二级质谱中y离子的数目，提高肽段在质谱中的响应和碎裂效率，从而实现肽段测序。 2.如权利要求1所述的基于肽段C末端选择性酶标记的质谱从头测序方法，其特征在于：所述有机相是乙腈、丙酮、异丙醇、乙腈中加入0-5％的二甲亚砜、乙腈中加入0-5％的N,N-二甲基甲酰胺、丙酮中加入0-5％的二甲亚砜、丙酮中加入0-5％的N,N-二甲基甲酰胺、异丙醇中加入0-5％的二甲亚砜、异丙醇中加入0-5％的N,N-二甲基甲酰胺中的一种或两种以上。 3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述肽段为：单一肽段或者是蛋白质酶解后多肽的混合物；所述肽段与带碱性基团的小分子的质量体积比为：0.005-1克每毫升。 4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述肽段C末端酰胺酶，其特征在于：能够特异性催化肽段C末端的羧基发生酰胺化反应，而对肽段侧链的羧基无催化作用。 5.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述带碱性基团的小分子为：肼、乙二胺、丁二胺、戊二胺、环己二胺、三(2-氨基乙基)胺中的一种或两种以上；所述肽段与带碱性基团的小分子的质量体积比为：0.005-1克每毫升；所述酰胺化反应的温度为25-50℃，反应时间为12-72h。 6.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述带氨基的不饱和烃类为丙烯胺、丙炔胺、2-丁烯胺、3-丁炔胺中的一种或两种以上；所述肽段与带氨基的不饱和烃类的质量体积比为：0.005-1克每毫升；所述酰胺化反应的温度为25-50℃，反应时间为12-72h。 7.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述碱性功能分子为巯基乙胺、巯基丙胺、3-巯基-1,2,4-三氮唑、N,N-二甲基叠氮乙基胺、3-叠氮基丙胺中的一种或两种以上。 8.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述肽段测序是利用二级质谱中鉴定到的肽段的b离子和C末端碱性基团标记后增加的y离子，根据碎片离子之间的质量差异判断氨基酸种类，实现肽段从头测序分析。 9.如权利要求1-8任一所述的基于肽段C末端选择性酶标记的质谱从头测序方法，其特征在于：应用于肽段、蛋白质酶解产生的多肽的测序。
所属类别：	发明专利