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原文传递一种基于纳孔有机共价骨架材料的内源性肽富集方法

专利名称：	一种基于纳孔有机共价骨架材料的内源性肽富集方法
摘要：	本发明涉及一种基于纳孔有机共价骨架材料的内源性肽富集方法。本方法使用一种具有六方堆、均一孔道结构的共价有机骨架聚合物材料，以蛋白及其酶解液的混合物，以及人血清样品为模式样品，利用材料均一孔径对蛋白等大分子的排阻作用和材料与内源性肽间的疏水及静电作用，采用固相萃取(SPE)或者分散固相萃取(dSPE)分离模式，通过优化上样液、淋洗液和洗脱液的组成、酸碱性、缓冲盐等参数，实现了对复杂样品中内源性肽的高效选择性富集。该方法具有稳定性好、选择性高、吸附量大、灵活性强、操作简便可控等优点，可用于各种复杂生物样品中的内源性肽富集。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	辽宁;21
申请人：	中国科学院大连化学物理研究所
发明人：	梁鑫淼;张小菲;李秀玲
专利状态：	有效
申请日期：	2017-12-15T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-25T00:00:00+0800
申请号：	CN201711350885.8
公开号：	CN109932463A
代理机构：	沈阳科苑专利商标代理有限公司
代理人：	马驰
分类号：	G01N30/08(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	116023 辽宁省大连市中山路457号
主权项：	1.一种基于纳孔有机共价骨架材料的内源性肽富集方法，其特征在于，将共价有机骨架聚合物与蛋白及其酶解物、或者血清接触，采用柱固相萃取模式或分散固相萃取模式分离富集内源性肽。 2.如权利要求1所述的基于纳孔有机共价骨架材料的内源性肽的富集方法，其特征在于：所述共价有机骨架聚合物材料简写为TPB-DMTP-COF，其结构式所示： 3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述共价有机骨架聚合物TPB-DMTP-COF是由2，5-二甲氧基对苯二甲醛和1，3，5-三(4-氨苯基)苯，在乙酸催化下于120℃聚合得到。 4.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述共价有机骨架聚合物材料TPB-DMTP-COF的比表面积是826.5m2g-1，该材料具有六方密堆规则排列的孔道结构，孔径均一，为2.5nm，其表面电荷性质可通过pH来调节，当pH＜5.9时材料表面带正电荷，当pH＞5.9时材料表面带负电荷。 5.如权利要求1所述的方法，其特征在于：将所述共价有机骨架聚合物TPB-DMTP-COF作为富集材料，蛋白及其酶解物、或者血清为样品材料，采用柱固相萃取模式(SPE)或分散固相萃取模式(dSPE)富集和纯化内源性肽；在SPE模式下，首先将TPB-DMTP-COF富集材料加载到末端带有筛板的移液枪枪头或者SPE小柱上，采用洗脱液冲洗富集材料，之后用上样液平衡富集材料，然后将溶解在上样液中的样品材料加载到富集材料上，之后采用淋洗液冲洗富集材料，最后用洗脱液洗脱富集材料上的内源性肽；在dSPE模式下，将TPB-DMTP-COF富集材料置于离心管中，采用洗脱液冲洗富集材料，然后用上样液平衡富集材料，之后把富集材料与溶解在上样液中的样品材料混合，孵化后，离心弃上清液，所剩沉淀部分用淋洗液冲洗，震荡后，再次离心弃上清液，沉淀部分用洗脱液洗脱内源性肽，震荡后，离心取上清液浓缩即得内源性肽。 6.如权利要求或5所述的方法，其特征在于：上样液组成为缓冲盐组成的缓冲液与有机溶剂的混合液，有机溶剂的体积比例为0-20％，缓冲盐的浓度为2-200mM，上样液pH在3-12范围内；淋洗液组成为缓冲盐组成的缓冲液与有机溶剂的混合液，有机溶剂的体积比例为0-20％，缓冲盐的浓度为2-200mM，淋洗液pH在3-12范围内；洗脱液组成为缓冲盐组成的缓冲液与有机溶剂的混合液，有机溶剂的体积比例为20-90％，缓冲盐的浓度为2-200mM，洗脱液pH在3-12范围内。 7.按照权利要求5所述的方法，其特征在于，所用的蛋白酶解物应旋干去盐，与蛋白一起重溶于上样液，样品的上样量与TPB-DMTP-COF材料量之间的体积比例为1∶2-1∶1000，体积比优选为1∶2-1∶100，实验操作温度为15-50摄氏度。 8.按照权利要求4或5所述的方法，其特征在于，采用SPE模式富集内源性肽，冲洗富集材料所用洗脱液的体积为富集材料体积的2-50倍，平衡富集材料所用的上样液体积为富集材料体积的2-50倍，上样体积为富集材料体积的2-200倍，淋洗富集材料所用的淋洗液体积为富集材料体积的2-100倍，洗脱内源性肽所用的洗脱液体积为富集材料体积的2-30倍；采用dSPE模式富集内源性肽，冲洗富集材料所用洗脱液的体积为富集材料体积的2-500倍，平衡富集材料所用的上样液体积为富集材料体积的2-500倍，上样体积为富集材料体积的2-1000倍，淋洗富集材料所用的淋洗液体积为富集材料体积的2-1000倍，洗脱内源性肽所用的洗脱液体积为富集材料体积的2-200倍。 9.按照权利要求4或5所述的方法，其特征在于，采用dSPE模式富集内源性肽，振荡转数为100-2500rpm，样品材料与富集材料之间的孵化时间为10-120分钟，孵化温度为15-50摄氏度。 10.按照权利要求4或5所述的方法，其特征在于，有机溶剂包括但不局限于乙腈、甲醇、乙醇、丙醇、丙酮、正己烷、环己烷、二硫化碳、四氯化碳、二氯甲烷、溴乙烷、苯、甲苯、乙酸乙酯、正丁醇、乙醚、异丙醇、四氢呋喃等中的一种或二种以上，缓冲盐包括但不局限于甲酸铵，甲酸钠，乙酸铵，乙酸钠，碳酸氢铵，碳酸钠，碳酸氢钠，磷酸氢二钠，磷酸二氢钠，磷酸氢二钾，磷酸二氢钾，柠檬酸钠，邻苯二甲酸氢钾，三羟甲基氨基甲烷等。
所属类别：	发明专利