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原文传递检测8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶的传感器及方法

专利名称：	检测8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶的传感器及方法
摘要：	本发明公开检测8‑羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶的传感器及方法，传感器包括产生检测8‑羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶的电信号的第一电极，其表面修饰有CP‑DNA和通过碱基互补配对结合的TD‑DNA；检测方法为：将CP‑DNA修饰至第一电极表面；将TD‑DNA与CP‑DNA互补配对进而结合至第一电极表面，获得二茂铁电信号后将第一电极浸入含有不同浓度hOGG1的缓冲液，进行8‑羟基鸟嘌呤切割与杂交链式反应，获得含有六铵合钌电信号；读取浸泡后第一电极上的差分脉冲伏安信号，计算二茂铁电信号降低量、六铵合钌电信号增加量与hOGG1浓度之间的关系。本发明将杂交链式反应与生物传感器结合，待测物质hOGG1浓度的检测限大大降低，具有显著的特异性和较高的稳定性，灵敏度高、快速、成本低。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	中国科学院苏州生物医学工程技术研究所
发明人：	杨大威;缪鹏;陈锡峰;孟凡渝
专利状态：	有效
申请日期：	2019-03-11T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-28T00:00:00+0800
申请号：	CN201910202397.5
公开号：	CN109946360A
代理机构：	北京远大卓悦知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	韩飞
分类号：	G01N27/327(2006.01);G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	215163 江苏省苏州市高新区科技城科灵路88号
主权项：	1.一种检测8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶的传感器，其特征在于，其包括：第一电极，其用于产生检测8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶的电信号；所述第一电极表面修饰有CP-DNA和通过碱基互补配对结合的TD-DNA。 2.如权利要求1所述的检测8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶的传感器，其特征在于，其还包括：第二电极，其与所述第一电极组成电池；第三电极，其具有恒定的电位以控制所述第一电极的电势。 3.如权利要求1所述的检测8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶的传感器，其特征在于，互补配对进而结合前，所述第一电极表面还依次进行包括水虎鱼溶液浸泡、蒸馏水冲洗、打磨、超声清洗、电化学清洗的清洗预处理。其中，所述水虎鱼溶液由浓度为98％的H2SO4和浓度为30％H2O2按3:1制成。 4.一种如权利要求1所述的检测8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶的传感器进行检测的方法，其特征在于，其包括以下步骤：将CP-DNA修饰至所述第一电极表面；将末端修饰有二茂铁基团的TD-DNA与CP-DNA互补配对进而结合至所述第一电极表面，获得含有二茂铁电信号的第一电极；将含有二茂铁电信号的第一电极浸入含有不同浓度hOGG1的缓冲液中，进行8-羟基鸟嘌呤切割与杂交链式反应，获得含有六铵合钌电信号的第一电极；读取浸泡后第一电极上的差分脉冲伏安信号，计算所述二茂铁电信号值变化量、所述六铵合钌电信号值变化量与hOGG1浓度之间的关系。 5.如权利要求4所述的检测8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶的传感器进行检测的方法，其特征在于，将CP-DNA修饰至所述第一电极表面之前，还包括对第一电极进行如下步骤的清洗预处理：将第一电极在水虎鱼溶液中浸泡5分钟后用蒸馏水冲洗干净；将冲洗后的第一电极依次用3000目和5000目的砂纸打磨以及1.0μm、0.3μm、0.05μm的氧化铝粉末打磨至光滑；将打磨后的第一电极分别在乙醇和蒸馏水中超声清洗各5分钟；将超声清洗后的第一电极在50％的HNO3溶液浸泡30分钟、0.5M H2SO4溶液中进行电化学清洗。其中，所述水虎鱼溶液由浓度为98％的H2SO4和浓度为30％H2O2按3:1制成。 6.如权利要求4所述的检测8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶的传感器进行检测的方法，其特征在于，将CP-DNA修饰至所述第一电极表面，包括步骤：将所述第一电极与含有0.5μM CP-DNA的溶液在25℃下反应16小时完成修饰；将修饰后的第一电极依次进行1mM巯基乙醇中浸泡一个小时、蒸馏水中冲洗、氮气流中干燥的处理。 7.如权利要求4所述的检测8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶的传感器进行检测的方法，其特征在于，将末端修饰有二茂铁基团的TD-DNA与CP-DNA互补配对进而结合至所述第一电极表面，包括步骤：将CP-DNA修饰的第一电极在37℃下与浓度为1μM的末端修饰有二茂铁基团的TD-DNA的溶液反应1小时。 8.如权利要求4所述的检测8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶的传感器进行检测的方法，其特征在于，将含有二茂铁电信号的第一电极浸入含有不同浓度hOGG1的缓冲液中，进行8-羟基鸟嘌呤切割与杂交链式反应，包括步骤：在37℃的条件下将含有二茂铁电信号的第一电极浸泡在含有不同浓度的hOGG1溶液中，反应1小时；在25℃的条件下将第一电极浸泡在含有0.5μM的Linker DNA、5μM H1及5μM H2溶液中，反应2小时。 9.如权利要求4所述的检测8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶的传感器进行检测的方法，其特征在于，在0.002U/mL至10U/mL的范围内，所述二茂铁电信号值变化量、所述六铵合钌电信号值变化量以及hOGG1浓度之间的关系满足回归方程：y＝0.551x+0.52；其中，y是所述六铵合钌电信号值变化量与所述二茂铁电信号值变化量比值的对数，x是hOGG1浓度的对数。 10.如权利要求4所述的检测8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶的传感器进行检测的方法，其特征在于，还包括：第二电极，其与所述第一电极组成电池；第三电极，其具有恒定的电位以控制所述第一电极的电势。
所属类别：	发明专利