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原文传递一种检测猪流行性腹泻病毒的胶体金试纸条

专利名称：	一种检测猪流行性腹泻病毒的胶体金试纸条
摘要：	本发明公开一种检测猪流行性腹泻病毒的胶体金试纸条，胶体金结合垫上喷涂有抗猪流行性腹泻病毒的单克隆抗体A‑胶体金标记物，硝酸纤维素膜上喷涂有抗猪流行性腹泻病毒的单克隆抗体B的检测线和山羊抗鼠IgG的质控线，单克隆抗体A由编号为10F10的杂交瘤细胞分泌产生，单克隆抗体B由编号为4A11的杂交瘤细胞分泌产生。本发明的试纸条使用双单抗检测，检测快速、灵敏度高且特异性强，检测结果清晰易于判断，整个检测过程无需任何仪器、操作人员无需任何专业培训；试纸条的使用操作简单，适于现场诊断使用。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖北;42
申请人：	武汉科前生物股份有限公司
发明人：	贾慧勤;孙圣福;但汉并;董晓辉;李盼盼;张弛;马磊;范俊青;周云朵
专利状态：	有效
申请日期：	2019-03-04T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-28T00:00:00+0800
申请号：	CN201910159376.X
公开号：	CN109946457A
代理机构：	南京纵横知识产权代理有限公司
代理人：	祝蓉蓉;徐瑛
分类号：	G01N33/569(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	430000 湖北省武汉市东湖新技术开发区高新二路419号
主权项：	1.一种检测猪流行性腹泻病毒的胶体金试纸条，包括硬质聚氯乙烯底板、硝酸纤维素膜、样品垫、胶体金结合垫和吸水纸，其特征在于，所述硝酸纤维素膜粘贴在所述聚氯乙烯底板上，所述硝酸纤维素膜的两端分别粘贴有所述胶体金结合垫、吸水纸，所述胶体金结合垫上粘贴有所述样品垫；所述胶体金结合垫上喷涂有抗猪流行性腹泻病毒的单克隆抗体A-胶体金标记物，与所述胶体金结合垫相邻的所述硝酸纤维素膜上喷涂有抗猪流行性腹泻病毒的单克隆抗体B的检测线，与所述吸水纸相邻的所述硝酸纤维素膜上喷涂有山羊抗鼠IgG的质控线；所述单克隆抗体A由保藏在中国典型培养物保藏中心的编号为10F10的杂交瘤细胞分泌产生，分类命名为分泌抗猪流行性腹泻病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞10F10，保藏编号为CCTCC NO:C201905；所述单克隆抗体B由保藏在中国典型培养物保藏中心的编号为4A11的杂交瘤细胞分泌产生，分类命名为分泌抗猪流行性腹泻病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞4A11，保藏编号为CCTCC NO:C201904。 2.根据权利要求1所述的一种检测猪流行性腹泻病毒的胶体金试纸条，其特征在于，所述单克隆抗体A-胶体金标记物的具体制备步骤为：在胶体金中加入碳酸钾调节pH至8.0后，边磁力搅拌边滴加所述单克隆抗体A，搅拌40min后再加入质量浓度为10％的牛血清白蛋白至牛血清白蛋白的终浓度为1％，继续搅拌40min后分装于离心管中，10000r/min离心30min，弃去上清液；将离心分离出的沉淀加入0.01mol/L、pH值为9.0的Tris缓冲液中重悬，即得到抗猪流行性腹泻病毒的所述单克隆抗体A-胶体金标记物。 3.根据权利要求1所述的一种检测猪流行性腹泻病毒的胶体金试纸条，其特征在于，编号为10F10的杂交瘤细胞、编号为4A11的杂交瘤细胞由纯化的猪流行性腹泻病毒筛选得到；猪流行性腹泻病毒的纯化具体包括以下步骤： S301.将猪流行性腹泻病毒液反复冻融3次，在2～8℃条件下，12000r/min离心10分钟，收集猪流行性腹泻病毒上清液； S302.在体积为V的所述猪流行性腹泻病毒上清液中一边加入硫酸铵一边持续搅拌，搅拌完成后2～8℃沉淀过夜；每100mL猪流行性腹泻病毒上清液中加入42.5g硫酸铵； S303.将步骤S302中沉淀过夜后的猪流行性腹泻病毒上清液12000r/min离心10分钟，弃去上清并将离心分离出的沉淀用体积为3％V、浓度为0.01mol/L、pH值为7.4的PBS重悬； S304.将步骤S303中得到的重悬病毒混合液在0.85％的氯化钠溶液中、2～8℃下透析，中途换液3次；透析之后在2～8℃条件下，以27000r/min离心2小时并弃去上清，沉淀用体积为3％V、浓度为0.01mol/L、pH值为7.4的PBS重悬； S305.制备质量浓度为20％、35％、45％和60％的不连续梯度的蔗糖溶液，将步骤S304中得到的重悬病毒混合液加在20％蔗糖界面上；在2～8℃条件下，以35000r/min离心90分钟，收集20％层～35％层界面之间的病毒液，－20℃保存备用。 4.根据权利要求1所述的一种检测猪流行性腹泻病毒的胶体金试纸条，其特征在于，所述单克隆抗体A-胶体金标记物按10μL/cm的速度喷于所述胶体金结合垫上。 5.根据权利要求1所述的一种检测猪流行性腹泻病毒的胶体金试纸条，其特征在于，所述检测线的制备方法为：将包含浓度为0.5mg/mL的所述单克隆抗体B按0.8μL/cm的速度喷于所述硝酸纤维素膜上。 6.根据权利要求1所述的一种检测猪流行性腹泻病毒的胶体金试纸条，其特征在于，所述质控线的制备方法为：将包含浓度为1.5mg/mL的羊抗鼠IgG按0.8μL/cm的速度喷于所述硝酸纤维素膜上。 7.根据权利要求1所述的一种检测猪流行性腹泻病毒的胶体金试纸条，其特征在于，所述检测线与质控线之间的距离为5mm。
所属类别：	发明专利